Test di suscettibilità agli antibiotici: preparazione, decifrazione, quanto viene fatto

Oggigiorno, i test di sensibilità agli antibiotici stanno diventando sempre più popolari. La microflora umana è piuttosto diversificata, rappresentata da un gran numero di microrganismi in vari biotopi.

Le aziende farmaceutiche hanno sviluppato un gran numero di agenti antibatterici, gli antibiotici, che contribuiscono a mantenere un rapporto e un numero normali di popolazioni microbiche. Con l'avvento degli antibiotici, molte malattie precedentemente considerate fatali sono state curate. Ma anche i microrganismi lottano per sopravvivere, adattandosi gradualmente all'azione dei farmaci antibatterici. Nel tempo, molti di loro hanno acquisito resistenza a numerosi farmaci, fissandola nel genotipo e iniziando a trasmetterla di generazione in generazione. Pertanto, i nuovi microrganismi sono inizialmente insensibili a determinati farmaci e il loro utilizzo può risultare inefficace. I farmacisti stanno sviluppando sempre più nuovi prodotti, aggiungendovi nuovi principi attivi e modificandone la formula di base. Ma gradualmente si sviluppa anche una resistenza a questi farmaci.

La causa dell'aumentata resistenza della microflora a molti farmaci, e persino ai loro analoghi, è spesso nascosta nell'uso scorretto e incontrollato degli antibiotici. I medici prescrivono antibiotici e le loro combinazioni per diverse malattie batteriche. Allo stesso tempo, non viene effettuata una valutazione preliminare della loro efficacia e non viene selezionato il dosaggio ottimale, il che è fondamentale sia per il trattamento che per prevenire i meccanismi di sviluppo di ulteriore resistenza. Molte persone prescrivono erroneamente la terapia antibiotica anche per le malattie virali, il che è inefficace, poiché l'antibiotico non è efficace contro i virus.

La terapia viene spesso prescritta senza test di sensibilità preliminari, senza la selezione del principio attivo e del dosaggio necessario per ogni specifica malattia e biotopo. Poiché gli antibiotici vengono prescritti "alla cieca", spesso si verificano casi in cui non mostrano alcuna attività contro i microrganismi che hanno causato la malattia e la cui popolazione deve essere ridotta. Al contrario, agiscono su altri rappresentanti della microflora, causando la disbatteriosi, una patologia anch'essa piuttosto pericolosa e che può portare a gravi conseguenze. Particolarmente pericolosi sono i casi in cui un antibiotico distrugge la normale microflora, che ha il compito di proteggere l'organismo e mantenerne il normale funzionamento. Ci sono anche casi in cui viene prescritta una dose eccessiva o insufficiente di farmaco.

I pazienti sono anche irresponsabili riguardo al trattamento. Spesso, il trattamento viene interrotto dopo la scomparsa dei sintomi della malattia. Allo stesso tempo, molti preferiscono non completare l'intero ciclo di trattamento. Questo è uno dei fattori che contribuiscono allo sviluppo di resistenza nei batteri. L'intero ciclo di trattamento è progettato per uccidere completamente la microflora patogena. Se il ciclo non viene completato, non viene completamente distrutta. I microrganismi che sopravvivono subiscono mutazioni, sviluppano meccanismi che forniscono loro protezione da questo farmaco e lo trasmettono alle generazioni successive. Il pericolo è che la resistenza si sviluppi non solo in relazione a questo specifico farmaco, ma anche all'intera classe di farmaci.

Pertanto, oggi uno dei mezzi più efficaci di terapia razionale e prevenzione della resistenza è la determinazione preliminare della sensibilità al farmaco prescritto e la selezione del suo dosaggio ottimale.

[ 1 ], [ 2 ], [ 3 ], [ 4 ], [ 5 ], [ 6 ], [ 7 ], [ 8 ]

Indicazioni per la procedura test di sensibilità agli antibiotici

Normalmente, tale analisi dovrebbe essere eseguita in tutti i casi in cui sia necessaria una terapia antibatterica. In base alle leggi fondamentali della terapia antibiotica, qualsiasi antibiotico può essere prescritto solo dopo aver effettuato una valutazione preliminare della sensibilità della microflora a tale agente e aver determinato la concentrazione ottimale del principio attivo in condizioni di laboratorio. Nella pratica, per vari motivi e circostanze, tale studio non viene eseguito prima dell'inizio del trattamento e il medico è costretto a selezionare un farmaco "a caso".

Oggi, i test di sensibilità vengono eseguiti solo nei casi in cui il medico nutra seri dubbi sull'efficacia del farmaco prescritto, in caso di prolungata mancanza di efficacia del farmaco e anche quando lo stesso farmaco viene utilizzato ripetutamente in un periodo di tempo limitato. La sensibilità viene spesso determinata nel trattamento delle malattie sessualmente trasmissibili. Molti specialisti si rivolgono a questi test in caso di effetti collaterali, reazioni allergiche e quando è necessario sostituire un farmaco con un altro.

L'analisi viene spesso utilizzata anche per selezionare i farmaci per la terapia antibatterica durante il periodo di recupero dopo interventi chirurgici, interventi laparoscopici e asportazioni di organi. Nei reparti di chirurgia e di chirurgia purulenta, tale studio è semplicemente necessario, poiché la resistenza si sviluppa piuttosto rapidamente. Inoltre, si sviluppano batteri super-resistenti "ospedalieri". Molte cliniche private affrontano la prescrizione di farmaci con piena responsabilità, solo dopo averne verificato la sensibilità. In molti casi, il budget delle istituzioni statali semplicemente non consente di condurre tali studi per ogni paziente che necessita di terapia antibatterica.

[ 9 ], [ 10 ], [ 11 ]

Preparazione

La preparazione per l'esame non richiede misure particolari. È la stessa di qualsiasi altro esame. Alcuni giorni prima dell'esame, è consigliabile astenersi dal consumo di alcolici. La mattina del prelievo del materiale, nella maggior parte dei casi, non si può né mangiare né bere. Tutto dipende però dal tipo di analisi. Il materiale per l'esame può variare a seconda della patologia.

In caso di malattie della gola e delle vie respiratorie, viene eseguito un tampone faringeo e nasale. In venereologia, ginecologia e urologia, vengono prelevati tamponi genitali e campioni di sangue per l'analisi. Nelle malattie renali, spesso è richiesta l'analisi delle urine. In caso di malattie gastrointestinali e alcune malattie infettive, vengono esaminate feci e vomito. Talvolta possono essere esaminati latte materno, secrezioni nasali, secrezioni oculari, saliva ed espettorato. In caso di patologie gravi e sospetto di un processo infettivo, viene esaminato anche il liquido cerebrospinale. Lo spettro è piuttosto ampio.

Le caratteristiche della raccolta del materiale sono determinate dalla sua appartenenza biologica. Pertanto, urina e feci vengono raccolte al mattino in un contenitore pulito o in un apposito contenitore per materiale biologico. Il latte materno viene raccolto prima della poppata. La porzione centrale viene prelevata per l'esame. Lo striscio viene raccolto utilizzando un tampone speciale, che viene passato lungo le mucose, quindi immerso in una provetta con un terreno preparato. Il sangue viene raccolto in una provetta, da un dito o da una vena. Quando si raccolgono strisci dall'uretra o dalla vagina, si raccomanda di astenersi dai rapporti sessuali per diversi giorni.

Quando si raccoglie materiale biologico per la ricerca, è necessario innanzitutto garantirne la corretta raccolta e la sterilità. Tuttavia, nella maggior parte dei casi, questa è una preoccupazione del personale medico, mentre il paziente non dovrebbe preoccuparsene. Spesso, ginecologi e urologi si rivolgono a questo tipo di esami, seguiti in secondo luogo dagli otorinolaringoiatri per il trattamento delle patologie del rinofaringe e della faringe, nonché delle vie respiratorie superiori.

[ 12 ], [ 13 ], [ 14 ]

Tecnica test di sensibilità agli antibiotici

Il materiale biologico raccolto viene consegnato al laboratorio in condizioni sterili, dove vengono condotte ulteriori ricerche. Innanzitutto, si esegue la semina primaria su terreni nutritivi universali. Una parte del materiale viene inoltre prelevata per l'esame microscopico. Viene preparato uno striscio per l'esame microscopico e viene condotto un esame che consente di tracciare un quadro clinico approssimativo e di ipotizzare quali microrganismi siano presenti nel campione. Ciò consente di selezionare gli ambienti più ottimali per ulteriori ricerche e l'identificazione dei microrganismi. Inoltre, al microscopio è possibile osservare segni di infiammazione o di un processo oncologico.

Nel corso di diversi giorni, colonie di microrganismi crescono in una piastra Petri. Successivamente, diverse colonie vengono prelevate e trasferite in terreni nutritivi selettivi, che consentono di determinare un gruppo approssimativo di microrganismi. Le colonie vengono incubate per diversi giorni in un termostato, dopodiché inizia l'identificazione (determinazione del tipo di microrganismo). L'identificazione viene effettuata utilizzando specifici test biochimici e genetici, gli identificatori. Inoltre, possono essere condotti studi immunologici.

Dopo l'isolamento del patogeno principale, si valuta la sua sensibilità agli antibiotici. Esistono diversi metodi per questo scopo. Il metodo più comunemente utilizzato è la diluizione seriale o il metodo della diffusione su disco. I metodi sono descritti in dettaglio nei manuali di microbiologia, nelle linee guida e negli standard di laboratorio.

L'essenza del metodo di diffusione su disco consiste nel seminare i microrganismi identificati su un terreno nutritivo, su cui vengono posizionati appositi dischi imbevuti di antibiotici. La semina viene incubata in un termostato per diversi giorni, dopodiché vengono misurati i risultati. Viene valutato il grado di inibizione della crescita batterica da parte di ciascun antibiotico. Se il batterio è sensibile all'antibiotico, si forma una "zona di lisi" attorno al disco, in cui i batteri non si riproducono. La loro crescita è lenta o addirittura assente. Il diametro della zona di inibizione della crescita viene utilizzato per determinare il grado di sensibilità del microrganismo all'antibiotico e formulare ulteriori raccomandazioni.

Il metodo di diluizione seriale è il più accurato. A questo scopo, i microrganismi vengono seminati su un terreno nutritivo liquido, a cui viene aggiunto un antibiotico diluito secondo il sistema di diluizione decimale. Successivamente, le provette vengono poste in un termostato per l'incubazione per diversi giorni. La sensibilità agli antibiotici viene determinata dal grado di crescita batterica in un brodo nutritivo con l'aggiunta di antibiotici. Viene registrata la concentrazione minima alla quale i microrganismi continuano a crescere. Questo rappresenta il dosaggio minimo del farmaco (è necessario un ricalcolo dalle unità microbiologiche al principio attivo).

Si tratta di metodi microbiologici standard che costituiscono la base di qualsiasi ricerca. Implicano l'esecuzione manuale di tutte le manipolazioni. Oggi, molti laboratori sono dotati di apparecchiature speciali che eseguono tutte queste procedure in modo automatico. Uno specialista che lavora con tali apparecchiature deve solo essere in grado di utilizzarle e rispettare le norme di sicurezza e sterilità.

È necessario tenere presente che gli indici di sensibilità in condizioni di laboratorio e negli organismi viventi differiscono notevolmente. Pertanto, a una persona viene prescritto un dosaggio superiore a quello determinato durante lo studio. Ciò è dovuto al fatto che l'organismo non dispone di condizioni ottimali per la crescita dei batteri. In laboratorio, vengono create "condizioni ideali". Parte del farmaco può essere neutralizzata dall'azione della saliva e del succo gastrico. Parte viene neutralizzata nel sangue da anticorpi e antitossine prodotti dal sistema immunitario.

Test di sensibilità agli antibiotici nelle urine

Per prima cosa, viene raccolto il materiale biologico. Per farlo, è necessario raccogliere la parte centrale dell'urina del mattino e consegnarla al laboratorio. È importante mantenere la sterilità e non assumere antibiotici per diversi giorni prima dell'analisi, altrimenti si potrebbe ottenere un risultato falso negativo. Successivamente, viene eseguita una semina standard, la cui essenza consiste nell'isolare una coltura pura del patogeno e selezionare un antibiotico che abbia un effetto battericida ottimale su di esso. Viene determinata la concentrazione necessaria dell'antibiotico.

L'analisi delle urine viene spesso prescritta in caso di sospetto di un processo infettivo e infiammatorio dell'apparato genitourinario, in presenza di immunodeficienze e disturbi metabolici. Normalmente, l'urina è un liquido sterile. La durata di tale esame è di 1-10 giorni ed è determinata dalla velocità di crescita del microrganismo.

Test di sensibilità colturale e antibiotica

Lo studio prevede l'isolamento del microrganismo patogeno in una coltura pura. Talvolta possono essere presenti diversi microrganismi di questo tipo (infezione mista). Alcuni microrganismi sono in grado di formare biofilm, una sorta di "comunità microbica". Il tasso di sopravvivenza dei biofilm è molto più elevato rispetto a quello dei singoli microrganismi o delle associazioni. Inoltre, non tutti gli antibiotici sono in grado di influenzare il biofilm e penetrarlo.

Per determinare il patogeno e isolarlo in una coltura pura, si esegue la semina. Durante lo studio, vengono eseguite diverse semine in diversi terreni nutritivi. Successivamente, viene isolata una coltura pura, ne viene determinata l'affiliazione biologica e la sensibilità ai farmaci antibatterici. Viene quindi selezionata la concentrazione ottimale.

Per lo studio è possibile utilizzare qualsiasi materiale biologico, a seconda della patologia e della localizzazione del processo infettivo. La durata è determinata dalla velocità di crescita dei microrganismi.

[ 15 ], [ 16 ], [ 17 ], [ 18 ], [ 19 ], [ 20 ]

Test di sensibilità delle feci

Le feci vengono esaminate in caso di diverse patologie gastriche e intestinali, in caso di sospetto processo infettivo, intossicazione batterica o intossicazione alimentare. Lo scopo dello studio è isolare il patogeno e selezionare farmaci antibatterici ottimali per esso, ad alta attività. L'importanza di questo tipo di studio risiede nella possibilità di selezionare un farmaco che agisca solo sul patogeno, senza intaccare i rappresentanti della normale microflora.

La prima e fondamentale fase è la raccolta delle feci. Le feci devono essere raccolte in un apposito contenitore sterile al mattino. Le feci devono essere conservate per non più di 1-2 ore. Le donne con flusso mestruale dovrebbero rimandare l'analisi alla fine, poiché l'accuratezza dei risultati potrebbe variare. Il materiale viene consegnato al laboratorio per l'analisi. L'analisi viene eseguita utilizzando le tecniche microbiologiche standard di semina e isolamento di una coltura pura. Viene inoltre eseguito un antibiogramma. Sulla base dei risultati, vengono sviluppate delle raccomandazioni e viene definito un ulteriore schema di studio.

[ 21 ], [ 22 ], [ 23 ], [ 24 ]

Analisi della disbatteriosi con sensibilità

Il materiale per lo studio è costituito da feci prelevate immediatamente dopo l'atto della defecazione. La microflora normale del tratto gastrointestinale è composta da rappresentanti della flora normale e da diversi rappresentanti della flora patogena. La loro composizione, quantità e rapporto sono rigorosamente definiti e mantenuti entro i limiti consentiti. Se questo rapporto viene alterato, si sviluppa la disbatteriosi. Questa può manifestarsi in diversi modi. Se la quantità di microflora patogena aumenta bruscamente, possono svilupparsi malattie infettive. Se la quantità di un qualsiasi microrganismo diminuisce bruscamente, lo spazio libero viene occupato da altri rappresentanti non tipici del tratto gastrointestinale, ovvero patogeni. Spesso lo spazio libero è occupato da un fungo, con conseguente sviluppo di varie infezioni fungine e candidosi.

Per determinare la composizione quantitativa e qualitativa della microflora intestinale, viene eseguita un'analisi delle feci per la disbatteriosi. Convenzionalmente, tutti i rappresentanti che vivono nell'intestino vengono suddivisi in tre gruppi: patogeni, opportunisti e non patogeni. Di conseguenza, l'analisi si compone di tre parti. Ogni gruppo di microrganismi ha le proprie esigenze di fonte alimentare ed energetica. Ogni gruppo richiede terreni nutritivi e additivi selettivi separati.

In primo luogo, vengono eseguite l'analisi microscopica e la semina primaria. Successivamente, dopo la semina, vengono selezionate le colonie più grandi, simili per caratteristiche morfologiche ai rappresentanti di ciascun gruppo. Queste vengono trasferite su terreni selettivi. Dopo la crescita, i microrganismi vengono identificati e immediatamente testati per la sensibilità agli antibiotici. Vengono utilizzati metodi microbiologici standard.

Lo studio di un gruppo di microrganismi patogeni, oltre agli studi standard, prevede la determinazione dei batteri del tifo, del paratifo e della dissenteria. Si determina anche se una persona è portatrice di questi microrganismi. Uno studio completo per la disbatteriosi include anche lo studio dei rappresentanti del gruppo dei bifidobatteri e dei lattobacilli. Lo studio dura circa una settimana e dipende dalla velocità di crescita dei microrganismi.

[ 25 ], [ 26 ], [ 27 ], [ 28 ], [ 29 ]

Test di sensibilità ai batteriofagi

In caso di infezione intestinale, i batteriofagi vengono spesso utilizzati per il trattamento al posto degli antibiotici. I batteriofagi sono virus batterici sensibili solo a questi ultimi. Trovano un batterio con cui sono complementari, lo penetrano e gradualmente distruggono la cellula batterica. Di conseguenza, il processo infettivo si arresta. Tuttavia, non tutti i batteri sono sensibili ai batteriofagi. Per verificare se un determinato batteriofago mostrerà attività nei confronti dei rappresentanti della microflora, è necessario effettuare un'analisi.

Il materiale per lo studio sono le feci. L'analisi deve essere consegnata al laboratorio entro un'ora, altrimenti sarà impossibile eseguirla. È necessario eseguire l'analisi in più ripetizioni. Il metodo iniziale è simile a quello per la determinazione della sensibilità agli antibiotici. Innanzitutto, viene eseguita un'analisi microscopica preliminare del campione, seguita da una semina primaria su terreni nutritivi universali. Infine, viene isolata una coltura pura su terreni nutritivi selettivi.

Il lavoro principale si svolge con coltura pura. Vengono trattati con diversi tipi di batteriofagi. Se la colonia si dissolve (lisi), ciò indica un'elevata attività del batteriofago. Se la lisi è parziale, il batteriofago funziona moderatamente. In assenza di lisi, si può parlare di resistenza al batteriofago.

Il vantaggio della terapia fagica è che i batteriofagi non influiscono sull'organismo umano e non causano effetti collaterali. Si legano a determinati tipi di batteri e li lisano. Lo svantaggio è che sono molto specifici e hanno un effetto selettivo, e non sempre riescono ad attaccarsi ai batteri.

[ 30 ], [ 31 ], [ 32 ], [ 33 ], [ 34 ], [ 35 ], [ 36 ], [ 37 ], [ 38 ]

Analisi dell'espettorato per la sensibilità agli antibiotici

L'analisi consiste nello studio delle secrezioni delle vie respiratorie inferiori. L'obiettivo è determinare il tipo di microrganismi che agiscono come agenti causali della malattia. Viene eseguito anche un antibiogramma. In questo caso, viene determinata la sensibilità del patogeno agli antibiotici e viene selezionata la concentrazione ottimale. Viene utilizzato per le malattie delle vie respiratorie.

L'esame dell'espettorato e di altri contenuti di polmoni e bronchi è necessario per la scelta del regime terapeutico e per differenziare diverse diagnosi. Viene utilizzato per confermare o escludere la presenza di tubercolosi.

Innanzitutto, è necessario ottenere materiale biologico. Questo può essere ottenuto tossendo, espettorando o prelevandolo dalla trachea durante una broncoscopia. Esistono aerosol speciali che favoriscono l'espettorazione. Prima di raccogliere l'espettorato, è necessario sciacquare la bocca con acqua, il che ridurrà il grado di contaminazione batterica del cavo orale. Innanzitutto, si raccomanda di fare 3 respiri profondi e produrre una tosse produttiva. L'espettorato può anche essere raccolto per aspirazione dalla trachea. In questo caso, viene inserito un catetere speciale nella trachea. Durante la broncoscopia, un broncoscopio viene inserito nella cavità bronchiale. In questo caso, la mucosa viene lubrificata con un anestetico.

Il materiale viene quindi inviato al laboratorio per le analisi. Vengono eseguite la semina standard e l'esame microscopico. Viene quindi isolata una coltura pura e su di essa vengono eseguite ulteriori manipolazioni. Viene eseguito un antibiogramma, che consente di identificare lo spettro di sensibilità batterica e di selezionare il dosaggio ottimale.

In caso di sospetta tubercolosi, l'espettorato del mattino viene esaminato per tre giorni. Il risultato del test per la tubercolosi sarà disponibile in 3-4 settimane, poiché il Mycobacterium tuberculosis, l'agente eziologico della malattia, cresce molto lentamente.

Normalmente, dovrebbero essere rilevati i rappresentanti della microflora normale delle vie respiratorie. È inoltre necessario tenere presente che, in caso di ridotta immunità, gli indicatori della microflora normale possono variare.

Analisi dello sperma per la sensibilità agli antibiotici

Si tratta di un esame batteriologico dell'eiaculato degli spermatozoi con successiva selezione di antibiotici sensibili e delle relative concentrazioni. Viene eseguito più spesso nel trattamento dell'infertilità e di altre patologie dell'apparato riproduttivo maschile, nel caso in cui la malattia sia accompagnata da un processo infettivo. La causa principale dell'infertilità maschile nella maggior parte dei casi è un'infezione. Di solito, viene inizialmente eseguito uno spermiogramma. In base ai risultati, viene stabilita la capacità fecondante degli spermatozoi. Se in questa analisi si riscontra un numero elevato di leucociti, si può parlare di un processo infiammatorio. In questo caso, di solito viene prescritta immediatamente un'analisi microbiologica, poiché l'infiammazione è quasi sempre accompagnata da un'infezione. Sulla base dei risultati ottenuti, viene selezionata la terapia appropriata. L'esame è solitamente prescritto da un andrologo.

Anche la prostatite e le malattie veneree sono motivi validi per l'esecuzione dell'analisi. Viene prescritta anche se viene rilevata una malattia venerea nel partner.

La base per un'analisi corretta è, innanzitutto, la corretta raccolta del materiale biologico. Il materiale viene raccolto in appositi contenitori a collo largo. La temperatura di conservazione deve corrispondere alla temperatura corporea. In questo caso, il materiale può essere conservato per non più di un'ora. Congelato, può essere conservato per non più di un giorno. È inappropriato effettuare una coltura durante l'assunzione di antibiotici, poiché ciò altera il quadro clinico. Di solito, la coltura viene effettuata prima dell'inizio della terapia antibiotica. In alternativa, è consigliabile interrompere l'assunzione di farmaci 2-3 giorni prima dell'analisi.

Successivamente, la coltura viene seminata su un terreno nutritivo e incubata in un termostato per 1-2 giorni. Successivamente, viene isolata una coltura pura, quindi si procede all'identificazione, si determina la sensibilità, nonché il tipo e il tasso di crescita di ciascuna colonia. La sensibilità agli antibiotici viene determinata in caso di rilevazione di microrganismi patogeni. In media, l'analisi richiede 5-7 giorni.

[ 39 ], [ 40 ], [ 41 ], [ 42 ], [ 43 ]

Test di sensibilità al glutine

Esistono numerosi test che possono essere utilizzati per determinare la sensibilità immunologica a varie sostanze o agenti patogeni. In precedenza, il metodo principale era quello di condurre test basati sulla reazione di agglutinazione di anticorpi e antigeni. Oggi, questi test sono sempre meno utilizzati, poiché la loro sensibilità è molto inferiore a quella di molti metodi moderni, come i test del glutine. Nella pratica, il più delle volte si ricorre a un test della saliva per il glutine e all'analisi delle feci.

Il test di sensibilità al glutine viene utilizzato per diagnosticare vari disturbi intestinali. Si basa sulla reazione del sistema immunitario. Se il glutine viene aggiunto alle feci, la reazione si verifica o è assente. Questo è considerato un risultato falso positivo o falso negativo. Un risultato positivo indica una predisposizione alla colite, un'alta probabilità che si sviluppi. Conferma anche la celiachia.

È anche possibile eseguire un test del glutine utilizzando la saliva come materiale biologico. È possibile misurare la quantità di anticorpi anti-gliadina. Un risultato positivo indica sensibilità al glutine. Questo può indicare un'alta probabilità di diabete. Se entrambi i test sono positivi, è possibile confermare la diagnosi di diabete o celiachia.

[ 44 ], [ 45 ]

Test di sensibilità agli antibiotici per la clamidia

L'analisi viene eseguita per il trattamento di malattie infettive e infiammatorie del tratto urogenitale, in caso di sospetta clamidia. Il materiale per lo studio è un raschiamento della mucosa vaginale (nelle donne, uno striscio dall'uretra) negli uomini. La raccolta viene effettuata in sala operatoria utilizzando materiale monouso. È importante mantenere la sterilità. Prima del prelievo del materiale, è necessario astenersi dai rapporti intimi per 1-2 giorni prima dell'inizio dello studio. Se la donna è in mestruazione, il materiale viene raccolto 3 giorni dopo la sua completa cessazione.

Il materiale viene consegnato al laboratorio. Un'analisi completa include l'esame microscopico preliminare dello striscio. Ciò consente di determinare visivamente la microflora in base alle caratteristiche morfologiche e di selezionare correttamente i terreni nutritivi. Il contenuto di muco, pus e particelle epiteliali può indicare, direttamente o indirettamente, lo sviluppo di un processo infiammatorio o di una degenerazione cellulare maligna.

Successivamente, si esegue la semina primaria. La coltura viene incubata per diversi giorni in un termostato e l'identificazione viene eseguita in base alle caratteristiche colturali. Successivamente, la coltura viene trasferita su terreni nutritivi selettivi destinati alla coltivazione della clamidia. Le colonie risultanti vengono identificate mediante test biochimici. In seguito, si determina la sensibilità agli antibiotici utilizzando metodi standard. Vengono selezionati l'antibiotico più sensibile e la sua concentrazione. Per la coltivazione della clamidia sono necessari terreni speciali sviluppati specificamente per questo tipo di microrganismo, che contengono tutte le sostanze e i fattori di crescita necessari.

È anche possibile condurre uno studio utilizzando un metodo biologico. A questo scopo, i ratti vengono infettati con il patogeno. In alcuni laboratori, al posto dei ratti viene utilizzata una coltura tissutale appositamente coltivata. Ciò è dovuto al fatto che la clamidia è un parassita intracellulare e sono necessarie condizioni particolari per la sua coltivazione. Successivamente, i microrganismi vengono determinati utilizzando il metodo PCR. Per determinare la sensibilità, i microrganismi vengono trapiantati su un terreno nutritivo selettivo per la clamidia e, dopo alcuni giorni, i risultati vengono registrati. La resistenza o la sensibilità vengono valutate in base alla soppressione del processo infettivo nelle cellule.

[ 46 ], [ 47 ], [ 48 ], [ 49 ], [ 50 ], [ 51 ], [ 52 ], [ 53 ]

Quanto tempo ci vuole per eseguire un test di sensibilità agli antibiotici?

In media, l'analisi viene eseguita entro 5-7 giorni. Alcune analisi richiedono più tempo. Ad esempio, per la diagnosi di tubercolosi, bisogna attendere dalle 3 settimane a un mese per i risultati. Tutto dipende dalla velocità di crescita dei microrganismi. Spesso, il personale di laboratorio deve gestire casi in cui i pazienti richiedono analisi più rapide. E offrono persino un "pagamento aggiuntivo" per l'urgenza. Tuttavia, è importante comprendere che in questo caso nulla dipende dalle azioni dell'assistente di laboratorio. Dipende solo dalla velocità di crescita del microrganismo. Ogni tipo ha una propria velocità di crescita, rigorosamente definita.

Prestazione normale

Non esistono valori norma assoluti universali per tutte le analisi. In primo luogo, questi valori possono variare per ciascun biotopo. In secondo luogo, sono individuali per ciascun microrganismo. In altre parole, i valori norma per lo stesso microrganismo, ad esempio per la gola e l'intestino, sono diversi. Quindi, se lo stafilococco predomina nella gola come rappresentante della microflora normale, allora E. coli, bifidobatteri e lattobatteri predominano nell'intestino. Anche i valori per lo stesso microrganismo in diversi biotopi possono differire significativamente. Ad esempio, la Candida può essere normalmente presente in una certa quantità nella microflora urogenitale. Non è normalmente presente nella cavità orale. La presenza di Candida nella cavità orale può indicare la sua introduzione artificiale dal suo habitat naturale.

Urina, sangue e liquido cerebrospinale sono ambienti biologici che normalmente dovrebbero essere sterili, ovvero non dovrebbero contenere microflora. La presenza di microflora in questi fluidi indica un forte processo infiammatorio e infettivo, e indica anche il rischio di sviluppare batteriemia e sepsi.

In generale, esiste una classificazione approssimativa. L'unità di misura in microbiologia è UFC/ml, ovvero il numero di unità formanti colonie in 1 millilitro di fluido biologico. Il grado di contaminazione è determinato dal numero di UFC e varia in un ampio intervallo da 10 ¹ a 10 ⁹. Di conseguenza, 10 ¹ è il numero minimo di microrganismi, 10 ⁹ è un grado grave di infezione. Allo stesso tempo, un intervallo fino a 10 ³ è considerato normale; tutti gli indicatori superiori a questo numero indicano una riproduzione patologica dei batteri.

Per quanto riguarda la sensibilità agli antibiotici, tutti i microrganismi si dividono in resistenti, moderatamente sensibili e sensibili. Questo risultato è spesso espresso come una caratteristica qualitativa che indica la MID, la dose minima inibitoria dell'antibiotico che inibisce ancora la crescita del microrganismo. Per ogni persona, così come per ogni microrganismo, questi indicatori sono strettamente individuali.

[ 54 ], [ 55 ], [ 56 ], [ 57 ]

Il dispositivo per l'analisi

Quando si conducono studi batteriologici, in particolare per la determinazione della sensibilità agli antibiotici, un solo dispositivo non è sufficiente. È necessaria un'attrezzatura completa e completa per il laboratorio batteriologico. È fondamentale pianificare e selezionare attentamente le attrezzature adatte a ogni fase della ricerca. Nella fase di raccolta del materiale biologico, sono necessari strumenti sterili, scatole, contenitori, camere di stoccaggio e attrezzature per il trasporto del materiale in laboratorio.

In laboratorio, prima di tutto, avrete bisogno di un microscopio di alta qualità per la microscopia a striscio. Oggigiorno, esiste un gran numero di microscopi con una varietà di proprietà: dai tradizionali microscopi ottici a contrasto di fase e a forza atomica. Le moderne apparecchiature consentono di scansionare un'immagine nello spazio tridimensionale ed esaminarla ad alto ingrandimento con elevata precisione.

Nella fase di semina e incubazione dei microrganismi, potrebbero essere necessari autoclavi, armadi a calore secco, essiccatori, bagni di vapore e una centrifuga. È necessario un termostato, in cui avviene l'incubazione principale del materiale biologico.

Nella fase di identificazione dei microrganismi e di esecuzione di un antibiogramma, potrebbero essere necessari micromanipolatori, spettrometri di massa, spettrofotometri e colorimetri per vari calcoli e valutazioni delle proprietà biochimiche delle colture.

Inoltre, i laboratori moderni possono essere dotati di apparecchiature ad alta tecnologia in grado di eseguire tutte le fasi principali della ricerca sopra menzionate, fino al calcolo automatico dei risultati. Tra questi dispositivi rientra, ad esempio, un complesso laboratorio batteriologico basato su uno spettrometro di massa a tempo di volo. Questa linea di dispositivi consente di suddividere l'intero laboratorio in tre zone. La prima zona è quella sporca, dove vengono ricevuti e registrati i test. La seconda zona è quella di lavoro, dove si svolgono le principali ricerche microbiologiche. La terza zona è quella di sterilizzazione e autoclave, dove vengono preparati e smaltiti i materiali di lavoro.

I modelli consentono l'incubazione in un'ampia gamma di temperature e condizioni. Sono dotati di un analizzatore integrato di sangue e altri campioni biologici, che produce risultati con elevata accuratezza e affidabilità. Il kit include bilance elettroniche, bidistillatori, centrifughe, autoclavi e cabine di sterilizzazione, cuocitore automatico per terreni di coltura, bagnomaria con agitatore integrato, pHmetri, termometri e microscopi.

Viene utilizzato anche un analizzatore microbiologico, in cui vengono inseriti i campioni da analizzare, i terreni nutritivi e i set di test per determinare la sensibilità. Il dispositivo esegue gli studi necessari e fornisce una conclusione pronta all'uso.

Alzare e abbassare i valori

Solo un medico può decifrare l'analisi. Ma spesso i pazienti, dopo aver ricevuto i risultati, vanno nel panico, notando un gran numero di simboli e numeri incomprensibili. Per non perdersi, è consigliabile avere almeno un'idea generale di come decifrare l'analisi di sensibilità agli antibiotici. Di solito, la prima voce nei risultati indica il nome del microrganismo che è l'agente causale della malattia. Il nome è dato in latino. Può anche indicare un rappresentante della microflora normale che prevale nell'organismo, quindi non c'è bisogno di farsi prendere dal panico. La seconda voce indica il grado di diffusione, ovvero il numero di microrganismi. Di solito, questo numero varia da 10 ¹ a 10 ^9. La terza voce indica la forma di patogenicità e la quarta i nomi dei farmaci antibatterici a cui questo microrganismo è sensibile. La concentrazione minima inibente, alla quale la crescita del microrganismo viene inibita, è indicata accanto.

[ 58 ], [ 59 ], [ 60 ], [ 61 ], [ 62 ], [ 63 ]