Cariotipo

Per lo studio dei cromosomi vengono spesso utilizzate le emocolture a breve termine, così come le cellule del midollo osseo e le colture di fibroblasti. Il sangue consegnato al laboratorio con anticoagulante viene sottoposto a centrifugazione per la precipitazione dei globuli rossi e i leucociti vengono incubati nel terreno di coltura per 2-3 giorni. La fitoemagglutinina viene aggiunta al campione di sangue, poiché accelera l'agglutinazione degli eritrociti e stimola la divisione dei linfociti. La fase più adatta per lo studio dei cromosomi è la metafase della mitosi, quindi la colchicina viene utilizzata per fermare la divisione dei linfociti in questa fase. L'aggiunta di questo farmaco alla coltura porta ad un aumento della proporzione di cellule che si trovano in metafase, cioè nella fase del ciclo cellulare, quando i cromosomi sono meglio visibili. Ogni cromosoma si replica (produce la propria copia) e dopo la colorazione appropriata è visibile sotto forma di due cromatidi attaccati al centromero o alla costrizione centrale. Le cellule vengono quindi trattate con una soluzione di cloruro di sodio ipotonica, fissate e colorate.

Per la colorazione dei cromosomi, vengono utilizzati più frequentemente il colorante Romanovsky-Giemsa, il 2% di acetaminomina o il 2% di acetazina. Colorano i cromosomi interamente, in modo uniforme (il metodo di routine) e possono essere utilizzati per identificare anomalie numeriche dei cromosomi umani.

Per ottenere un quadro dettagliato della struttura dei cromosomi, identificazione (determinazione) dei singoli cromosomi o dei loro segmenti, vengono utilizzati vari metodi di colorazione differenziale. I metodi più comunemente usati sono Giemsa, così come G-e Q-bending. Un esame microscopico del farmaco lungo la lunghezza del cromosoma rivela una serie di bande colorate (eterocromatina) e non verniciate (eucromatina). Il carattere della striatura trasversale ottenuto in questo caso consente di identificare ciascun cromosoma nell'insieme, poiché l'alternanza delle strisce e le loro dimensioni sono strettamente individuali e costanti per ogni coppia.

Le piastre metafase delle singole cellule vengono fotografate. Singoli cromosomi vengono tagliati dalle fotografie e incollati sul foglio di carta in ordine; una tale immagine di cromosomi è chiamata cariotipo.

L'uso di colorazione aggiuntiva, così come i nuovi metodi per ottenere i preparati cromosomici, che consentono di allungare i cromosomi in lunghezza, aumentano significativamente l'accuratezza della diagnostica citogenetica.

Una speciale nomenclatura è stata sviluppata per descrivere il cariotipo umano. Il normale cariotipo di un uomo e una donna è indicato rispettivamente come 46, XY e 46, XX. Nella sindrome di Down, caratterizzata dalla presenza di un cromosoma 21 aggiuntivo (trisomia 21), il cariotipo femminile è descritto come 47, XX 21+ e gli uomini - 47, XY, 21+. In presenza di un'anomalia strutturale del cromosoma, è necessario indicare un braccio lungo o corto alterato: la lettera p indica un braccio corto, q un braccio lungo e una traslocazione. Così, quando il braccio corto del cromosoma 5 (la sindrome del "gatto-grido") viene cancellato, il cariotipo femminile viene descritto come 46, XX, 5p-. La madre di un bambino con traslocazione sindrome di Down - un portatore di una traslocazione bilanciata di 14/21 ha un cariotipo di 45, XX, t (14q; 21q). Il cromosoma di traslocazione si forma quando le lunghe braccia del cromosoma 14 e 21 si uniscono, mentre le spalle corte si perdono.

Ogni spalla è divisa in distretti, e a loro volta - in segmenti, e quelli e altri sono indicati con numeri arabi. Il centromero del cromosoma è il punto di partenza per il conteggio di regioni e segmenti.

Quindi, quattro marcatori sono usati per la topografia dei cromosomi: numero cromosomico, simbolo della spalla, numero dell'area e numero del segmento all'interno della regione data. Ad esempio, 6p21.3 disco significa che stiamo parlando della coppia 6 ° cromosoma, il suo braccio corto, zona 21, segmento 3. Ci sono personaggi più opzionali, in particolare pter - alla fine del braccio corto, qter - la fine del braccio lungo.

Il metodo di ricerca citogenetica consente di rilevare le delezioni e altri cambiamenti nei cromosomi solo nella dimensione di circa 1 milione di basi (nucleotidi).

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