Diagnosi di malattia granulomatosa cronica

Diagnostica

La diagnosi di malattia granulomatosa cronica si basa sulla valutazione dell'attività funzionale dei fagociti. Vengono utilizzati i seguenti test:

1. Test di riduzione al nitroblu di tetrazolio (test NBT). Normalmente, quando i fagociti assorbono il colorante giallo nitroblu di tetrazolio (NBT), la loro attività metabolica aumenta, mentre l'NBT viene ossidato e i prodotti di questa reazione assumono una colorazione blu. Se il metabolismo dei fagociti viene interrotto, l'intensità della colorazione blu diminuisce.
2. Chemiluminescenza dei neutrofili. L'ossidazione del substrato è accompagnata dall'emissione di luce ultravioletta o fluorescenza; l'intensità dell'emissione può essere utilizzata per valutare l'attività funzionale dei fagociti.
3. Valutazione dell'attività fagocitaria: capacità dei fagociti di distruggere i batteri catalasi-positivi in vitro.
4. Esame genetico dei pazienti e delle loro famiglie per rilevare disturbi dell'attività funzionale dei fagociti.

Definizione di tipi e sottotipi di malattia granulomatosa cronica

L'immunoblotting con anticorpi diretti contro tutti e quattro i componenti della NADPH ossidasi è comunemente utilizzato per differenziare i tipi e i sottotipi di malattia granulomatosa cronica. L'assenza di uno dei componenti citosolici (p47 ^phax o p67 ^phax ) dal blot indica una mutazione nel gene corrispondente, mentre l'assenza di uno dei componenti di membrana (gр91 ^phax o p22 ^phax ) non consente di rilevare nemmeno l'altro, poiché le subunità si stabilizzano a vicenda per la completa maturazione ed espressione. Alcuni ricercatori utilizzano la citofluorimetria con anticorpi anti-citocromo p558 per rilevare gp91 ^phax /p22 ^phax sulla superficie dei neutrofili. La diagnosi viene infine confermata dall'identificazione di una mutazione nel gene corrispondente.

Diagnosi prenatale della malattia granulomatosa cronica

Prima che le tecnologie di genetica molecolare diventassero disponibili, la diagnosi prenatale della malattia granulomatosa cronica veniva effettuata misurando l'attività della NADPH ossidasi dei neutrofili fetali e prelevando il sangue del cordone ombelicale tramite fetoscopia tra la 16a e la 18a settimana di gestazione. Oggi, l'analisi del DNA delle cellule del liquido amniotico o dei villi coriali viene eseguita per ricercare specifici difetti genetici utilizzando Southern blotting, PCR (reazione a catena della polimerasi) e polimorfismo di lunghezza dei frammenti di restrizione, metodi più affidabili che consentono una diagnosi precoce in gravidanza.

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