microscopio confocale

La microscopia confocale è ora considerata uno dei metodi più promettenti di imaging della pelle in vivo, e quindi l'interesse sia tra i medici che tra i rappresentanti degli istituti di ricerca scientifica è insolitamente alto.

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Funzionalità di microscopia confocale

In dermatologia, la microscopia laser confocale è utilizzata per:

• studiare la penetrazione dei composti nella pelle (percorsi di penetrazione, cinetica, distribuzione nella pelle);
• osservazione delle ghiandole (definizione dello stato attivo e passivo);
• studi del letto microcircolatorio (anche in tempo reale);
• diagnosi di neoplasie.

Senza discutere dei meriti e dei demeriti delle suddette varietà di microscopia confocale, notiamo che negli ultimi anni la microscopia confocale al laser a fluorescenza sta guadagnando popolarità.

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Microscopia confocale per l'esame della pelle

Il microscopio confocale offre due opportunità inestimabili: lo studio dei tessuti a livello cellulare nello stato di vita fisiologica e la dimostrazione dei risultati dello studio (cioè l'attività cellulare) in quattro dimensioni: altezza, larghezza, profondità e tempo. Per qualità dell'immagine e profondità di studio, il ruolo più importante è giocato dalla capacità del tessuto di trasmettere luce, in altre parole, dalla sua trasparenza. Il metodo della microscopia confocale è senza contatto, il raggio di luce non provoca alcun danno o disagio al paziente o all'animale da esperimento.

Per studiare la pelle, viene utilizzata la microscopia laser a scansione confocale (CSLM). Il metodo consente di vedere l'epidermide e lo strato di derma papillare con una risoluzione vicina all'istologia. Tutti i risultati del sondaggio vengono visualizzati sul monitor e salvati come pacchetto di file di immagine (sotto forma di microfilm (in dinamica) o microfotografia).

Esistono due tipi di metodo:

• Riflettente (riflettanza CSLM) - si basa sul fatto che varie strutture intracellulari e intercellulari hanno un diverso indice di rifrazione della luce, che consente di ottenere un'immagine di contrasto.
• fluorescenza (fluorescenza CSLM) - utilizza la luce laser che penetra nella pelle ed eccita in esso eso o endocromofori, che in risposta iniziano a emettere fotoni (cioè fluorescenza).

La risoluzione laterale è la distanza minima tra i punti situati sul piano orizzontale, vale a dire un piano parallelo alla superficie della pelle. La risoluzione assiale è la distanza minima tra i punti situati su un piano perpendicolare alla superficie della pelle.

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La storia della microscopia confocale

L'idea di creare un microscopio capace a livello cellulare di mostrare un taglio intravitale del tessuto vivente è stata attivamente sviluppata 130 anni fa. L'elemento principale dei moderni microscopi è stato progettato alla fine del XIX secolo ed era un disco rotante con i fori più piccoli disposti a spirale. Questo disco fu inventato nel 1883 da uno studente tedesco Paul Nipkov, in onore del quale ricevette il suo nome: il disco Nipkov (o disco nipkov). L'invenzione si basava sulla capacità della luce, attraverso i fori più piccoli del disco e della lente d'ingrandimento, per penetrare nella profondità del tessuto e illuminare il frammento cellulare a una distanza dalla superficie. Quando il disco ruota rapidamente, i frammenti vengono aggiunti all'immagine complessiva. Rimuovendo o approssimando la struttura all'oggetto, è possibile variare la profondità della sezione ottica del tessuto in esame.

Solo con l'avvento dei videoregistratori negli anni 1980 e computer in grado di elaborare le immagini agli inizi degli anni 1990 ci fu una vera e propria opportunità di creare in modo efficiente e applicare i microscopi moderni, che vengono utilizzati nel nostro tempo.