Salmonella - agenti patogeni del tifo e paratifo

Febbre tifoide - acuta grave malattia infettiva caratterizzata da profonda intossicazione generale, batteriemia e l'apparato linfatico intestinale specifica. L'intossicazione si manifesta con forte mal di testa, confusione, delirio (tifo da tifo greco - nebbia). Febbre tifoide come unità nosologica indipendente per la prima volta ha cercato di isolare medico russo AG Pyatnitskii indietro nel 1804, ma alla fine ha fatto nel 1822 R. Breton, che differenziano questa malattia di tubercolosi intestinale e ha suggerito la natura contagiosa di febbre tifoide.

L'agente eziologico della febbre tifoide - Salmonella typhi - è stato scoperto nel 1880 da K. Ebert, e isolato in coltura pura nel 1884 da K. Gaffki. Patogeni presto sono stati isolati e studiati di paratifo A e B - S. Paratyphi A e S. Paratyphi B. Genere Salmonella comprende un ampio gruppo di batteri, ma solo tre di loro - S. Typhi, S. Paratyphi A e S. Paratyphi B - causare una malattia in una persona con un quadro clinico di febbre tifoide. Morfologicamente sono indistinguibili: bastoncini gram-negativi corti con estremità arrotondate, lunghi 1-3,5 micron, diametro 0,5-0,8 micron; spore e capsule non si formano, hanno mobilità attiva (peritrichi). Il contenuto di G + C nel DNA è 50-52% mol.

Gli agenti causali di tifo e paratifo sono anaerobi facoltativi, una temperatura ottimale per la crescita di 37 ° C (ma possono crescere nell'intervallo da 10 a 41 ° C), pH 6,8-7,2; non sono esigenti per i nutrienti La crescita sul brodo è accompagnata da torbidità, sull'MPA si formano colonie rotonde, lisce e traslucide con un diametro di 2-4 mm. Tuttavia, le colonie di S. Typhi che hanno un antigene Vi sono torbide. Colonie S. Paratyphi In modo più grossolano, dopo pochi giorni, formano lungo i loro rulli particolari periferici. Negli ambienti Endomo, le colonie di tutte e tre le salmonelle sono incolori, sul bismuto-sulfitagar - nero. Nel caso della dissociazione su mezzi densi, crescono le colonie di forma R. L'ambiente selettivo per gli agenti causali della febbre tifoide e della paratifo è bile o bile brodo.

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Proprietà biochimiche di agenti patogeni di tifo e paratifo

Gli agenti causali di tifo e paratifo danno una reazione positiva con MR, non formano indolo, non liquefanno gelatina, riducono i nitrati in nitriti, non formano acetoina. S. Typhi non cresce su agar affamato con citrato. Le principali differenze biochimiche tra patogeni tifo e paratifo concluso che S. Typhi alcuni fermenti glucosio e altri carboidrati per formare acido solo, un S. Paratyphi A e S. Paratyphi B - e per formare acido e gas.

S. Typhi sulla capacità di fermentare xilosio e arabinosio si dividono in quattro tipi biochimici: I, II, III, IV.

Xilosio + - + -

Arabinose - - + +

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Struttura antigenica di agenti patogeni di tifo e paratifo

Le salmonelle hanno antigeni O e H. Sugli O-antigeni sono divisi in un gran numero di sierogruppi e, secondo gli antigeni H, in sierotipi (per maggiori dettagli sulla classificazione sierologica della salmonella, vedere la sezione successiva). S. Typhi, S. Paratyphi A e S. Paratyphi B differiscono tra loro sia in termini di O-antigeni (appartenenti a diversi sierogruppi) che di antigeni H ..

Nel 1934, A. Felix e R. Pitt stabilirono che S. Typhi, in aggiunta agli antigeni O e H, ha un altro antigene di superficie, che chiamarono l'antigene della virulenza (antigene Vi). Secondo la sua natura chimica, l'antigene Vi differisce dagli antigeni O- e H, è costituito da tre diverse frazioni, ma la sua base è il complesso polimero acido N-acetilgalattosaminuronico con una massa di 10 MD. L'antigene Vi si trova di solito in culture appena isolate, ma si perde facilmente sotto l'influenza di vari fattori (in particolare, se cresciuto a temperature superiori a 40 ° C e inferiori a 20 ° C, in terreni con acido carbolico, ecc.) a deposito lungo di culture, è distrutto a temperatura di 100 ° С durante 10 minuti. Dato che si trova più superficiale che l'O-antigene, la sua presenza impedisce cultura agglutinazione S. Typhi specifici O siero, quindi una cultura necessariamente controllato in agglutinazione con Vi-siero. Al contrario, la perdita dell'antigene Vi porta al rilascio dell'antigene O e al ripristino della agglutinazione O, ma l'agglutinazione Vi è persa. Il contenuto quantitativo di Vi-antigen in S. Typhi può variare notevolmente, quindi F. Kauffmann ha proposto di classificare S. Typhi in base al contenuto di Vi-antigen in tre gruppi:

• forme v pure (tedesco viel - molte);
• forme w pure (wenig tedesco - piccolo);
• forme vw intermedie.

Sono stati trovati tre insoliti mutanti di S. Typhi: forma Vi-I-R, le cellule non hanno antigeni H- e O, ma mantengono persistentemente l'antigene Vi; O-901 - privo di antigeni H- e Vi; H-901 - contiene antigeni O- e H, ma è privo di antigene Vi. Tutti e tre gli antigeni: O-, H- e Vi- hanno pronunciato proprietà immunogeniche. La presenza di antigeni Vi consente alla coltura di S. Typhi di essere tipizzata con fago. Esistono 2 tipi di fagi che lisano solo quelle culture che contengono l'antigene Vi: Vi-I è il fago universale, lisano la maggior parte delle culture di S. Typhi contenenti Vi; e una serie di fago Vi-II che lisano selettivamente la coltura di S. Typhi. Questo fu mostrato per la prima volta nel 1938 da J. Craig e K. Ian. Con l'aiuto dei Vi-fagi di tipo II, divisero S. Typhi in 11 tipi di fago. Nel 1987, erano stati identificati 106 diversi tipi di S. Typhi di Vi-phage. La loro sensibilità ai fagi corrispondenti è un segno stabile, pertanto la fagotipizzazione ha un importante significato epidemiologico.

Sono stati anche sviluppati gli schemi di fagotipizzazione di S. Paratyphi A e S. Paratyphi B, in base al quale sono suddivisi in dozzine di fagotipi. È significativo che i fagotipi della salmonella non possano differire l'uno dall'altro in nessun altro modo.

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Resistenza agli agenti patogeni del tifo e della paratifo

Gli agenti causali di tifo e paratifo nell'ambiente esterno (acqua, terra, polvere) persistono, a seconda delle condizioni, da diversi giorni a diversi mesi. L'acqua che scorre può sopravvivere fino a 10 giorni, congestizia - fino a 4 settimane di verdure e frutta -. 5-10 giorni sui piatti - fino a 2 settimane, nel burro, formaggio -. 3 mesi, sul ghiaccio - fino a 3 mesi . E altro ancora; il riscaldamento a una temperatura di 60 ° C uccide in 30 minuti e bollente - immediatamente. I disinfettanti chimici convenzionali li uccidono in pochi minuti. L'acqua del rubinetto contenente cloro ad una dose di 0,5-1,0 mg / l o ozonizzazione acqua garantirne la disinfezione affidabile sia della Salmonella e altri batteri enterici patogeni.

Fattori di patogenicità degli agenti patogeni di tifo e paratifo

La caratteristica biologica più importante degli agenti causali della febbre tifoide e della paratifo A e B è la loro capacità di resistere alla fagocitosi e moltiplicarsi nelle cellule del sistema linfoide. Non formano esotossine. Il fattore principale della loro patogenicità, oltre all'antigene Vi, è l'endotossina, che è caratterizzata da una tossicità insolitamente elevata. Tali fattori di patogenicità come la fibrinolisi, la plasmocoagulasi, la ialuronidasi, la lecitinasi, ecc., Si riscontrano molto raramente negli agenti patogeni delle infezioni da tifo e paratifo. La più alta frequenza si trova nel DNA-ase (75-85% delle colture di S. Typhi e S. Paratyphi B studiate). È stato stabilito che i ceppi di S. Typhi che hanno un plasmide con 6 mM sono più virulenti. Pertanto, la questione dei fattori di patogenicità di queste salmonelle rimane da studiare.

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Immunità postinfettiva

Malattie durevoli, prolungate e ripetute di tifo e paratifo sono rare. L'immunità è causata dalla comparsa di anticorpi contro antigeni Vi-, O- e H, cellule di memoria immunitaria e aumento dell'attività dei fagociti. L'immunità post-vaccinale, a differenza della postinfezione, è di breve durata (circa 12 mesi).

Epidemiologia del tifo e paratifo

La fonte di febbre tifoide e paratifo A è solo una persona, un malato o un corriere. La fonte della paratifo B, oltre all'uomo, può essere costituita da animali, compresi gli uccelli. Il meccanismo di infezione è fecale-orale. La dose infettante di S. Typhi di 105 cellule (causa una malattia del 50% dei volontari), infettando le dosi di salmonella di paratifo A e B è molto più alta. L'infezione si verifica principalmente come risultato del contatto diretto o indiretto, così come attraverso l'acqua o il cibo, specialmente il latte. Le maggiori epidemie hanno causato l'infezione da agenti patogeni (epidemie di acqua).

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Sintomi di tifo e paratifo

Il periodo di incubazione per la febbre tifoide è di 15 giorni, ma può variare da 7 a 25 giorni. Dipende dalla dose infettante, dalla virulenza dell'agente patogeno e dallo stato immunitario del paziente. La patogenesi e il quadro clinico della febbre tifoide e della paratifo A e B sono molto simili. Nello sviluppo della malattia, le seguenti fasi sono chiaramente rivelate:

• fase di invasione. L'agente causale penetra attraverso la bocca nell'intestino tenue;
• attraverso le vie linfatiche Salmonella entrare nel formazioni linfoidi piccola sottomucosa intestinale (le placche di Peyer e follicoli solitari) e li riproduce, causa linfangite e linfoadenite (originali granuli addominale-tifo);
• batteriemia: l'uscita del patogeno in grandi quantità nel sangue. Lo stadio della batteriemia inizia alla fine del periodo di incubazione e può (in assenza di un trattamento efficace) continuare per tutta la malattia;
• lo stadio di intossicazione si verifica a causa del decadimento dei batteri sotto l'azione delle proprietà battericide del sangue e del rilascio di endotossine;
• stadio di diffusione parenchimale. Dal sangue, la salmonella viene assorbita dai macrofagi del midollo osseo, della milza, dei linfonodi, del fegato e di altri organi. In un gran numero di casi, l'agente eziologico della febbre tifoide si accumula nei dotti biliari del fegato e nella cistifellea, dove trova condizioni favorevoli per la sua riproduzione e dove le proprietà battericide del sangue sono indebolite dall'influenza della bile;
• stadio escretore-allergico. Come la formazione di immunità inizia il processo di rilascio dal patogeno. Questo processo viene eseguito da tutte le ghiandole: salivare, intestino, sudore, latte (durante l'alimentazione del bambino), sistema urinario e soprattutto attivamente - fegato e cistifellea. La salmonella rilasciata dalla cistifellea di nuovo entra nell'intestino tenue, da cui parte viene escreta con le feci, e alcuni invadono di nuovo nei linfonodi. L'introduzione secondaria nei nodi già sensibilizzati provoca in essi una reazione iperergica, che si manifesta sotto forma di necrosi e formazione di ulcere. Questo stadio è pericoloso per la possibilità di perforazione della parete intestinale (ulcere), sanguinamento interno e sviluppo di peritonite;
• fase di recupero. Il processo di guarigione delle ulcere avviene senza la comparsa di cicatrici deturpanti sul terreno, sgomberate dalle incursioni necrotiche.

A sua volta, nel quadro clinico della malattia, si distinguono i seguenti periodi:

• I stadio iniziale - stadio incrementi (1a settimana): un graduale aumento della temperatura a 40-42 ° C, un aumento di intossicazione e altre manifestazioni della malattia.
• II - lo stadio di massimo sviluppo di tutti i sintomi - stadio acme (2-3 settimane di malattia): la temperatura è mantenuta ad un livello elevato;
• III - lo stadio di recessione della malattia - il quarto decremento (quarta settimana della malattia): una diminuzione graduale della temperatura e una diminuzione della manifestazione di altri sintomi;
• IV - fase di recupero.

Malattia 8-9 giorni, a volte più tardi, molti pazienti compare un'eruzione roseolous sulla pelle del ventre, petto e schiena. Rash (piccole macchie rosse) è una conseguenza dei processi produttivi e infiammatorie locali di natura allergica negli strati superficiali della pelle attorno ai vasi linfatici, che contengono abbondanti patogeno. Il recupero clinico non sempre coincide con batteriologico. Circa il 5% dei pazienti diventa portatore cronico di salmonella tifo o paratifo. Le ragioni alla base del trasporto a lungo termine (più di 3 mesi, e talvolta molti anni) di salmonella rimangono poco chiare. Un valore noto in carrier formazione svolto da infiammazione locale nella bile (talvolta urinaria) tratto che spesso sorgono in connessione con tifo, infezioni paratifoidi o esacerbata come risultato di queste infezioni. Tuttavia, un ruolo altrettanto importante nella formazione del vettore a lunga Salmonella tifo e paratifo A e B gioca L-trasformazione di loro. L-shaped Salmonella perdere H-, e parzialmente 0-VI-antigeni sono di solito trova, intracellulare (nei macrofagi di midollo osseo), e quindi non sono disponibili per entrambi chemioterapia o per gli anticorpi, e può persistere nel corpo malato da tempo. Ritornando alla forma originale e uscirne sua struttura antigenica salmonella più diventa nuovamente virulento penetrare nei dotti biliari, esacerbare il processo di batteri, sono escreti con le feci e quindi il vettore diventa una fonte di infezione per gli altri. È anche possibile che la formazione del trasporto batterico dipenda da un deficit del sistema immunitario.

Diagnosi di laboratorio di tifo e paratifo

Il primo e fondamentale metodo per diagnosticare la febbre tifoide e la paratifo è batteriologico - ottenere emocolture o mieloculture. A tal fine, esaminare il sangue o il midollo osseo puntato. Sangue meglio seminare su terreno Rapoport (brodo colico integrato con indicatore di glucosio e vetro float) in un rapporto di 1:10 (10 ml di terreno 1 ml di sangue). La semina deve essere incubata a 37 ° C per almeno 8 giorni e tenendo conto della possibile presenza di forme a L - fino a 3-4 settimane. Per sono utilizzati identificazione di Salmonella culture isolate (in base alle loro proprietà biochimiche) diagnostico adsorbito sieri contenenti anticorpi contro antigeni 02 (S. Paratyphi A), 04 (S. Paratyphi B) e 09 (S. Typhi). Se la coltura isolata di S. Typhi non è agglutinata con siero 09, deve essere controllata con Vi-sium.

Per isolare S. Typhi, è possibile utilizzare l'essudato, ottenuto scarificando roseolo-roseolocultures.

L'esame batteriologico delle feci, delle urine e della bile viene effettuato per confermare la diagnosi, il controllo del recupero batteriologico alla dimissione del convalescente e la diagnosi di trasporto batterico. In questo caso, il materiale precedentemente seminati in terreno di arricchimento (supporti contenenti sostanze chimiche come selenite, che inibiscono la crescita di E. Coli e altri rappresentanti della flora intestinale, ma non inibiscono la crescita di Salmonella) e poi con il mezzo arricchimento - per mezzo diagnostico differenziale ( Endo, bismuto sulfitagar) per isolare colonie isolate e ricavare da esse colture pure identificate dallo schema sopra. Per rilevare e O- Vi-antigene nel siero e feci dei pazienti possono essere utilizzati DGC TPHA con anticorpo Diagnostico, koagglyutinatsii reazione unità-emoagglutinazione, IFM. Per l'identificazione accelerata di S. Typhi, è promettente utilizzare come sonda un frammento di DNA che trasporta il gene Vi-antigenico (tempo di identificazione 3-4 ore).

Dalla fine della prima settimana della malattia, gli anticorpi compaiono nel siero dei pazienti, pertanto, al fine di diagnosticare la febbre tifoide nel 1896, F. Vidal ha proposto la reazione di agglutinazione del tubo espanso. La dinamica degli anticorpi contro S. Typhi è unica: gli anticorpi anti-antigene appaiono prima di tutto, ma il loro titolo diminuisce rapidamente dopo il recupero; Gli anticorpi anti-H appaiono più tardi, ma persistono dopo malattie e vaccinazioni per anni. In considerazione di questa circostanza, la reazione di Vidal viene posta simultaneamente con i test diagnostici O e H separati (così come con la diagnostica paratifo A e B) per escludere possibili errori associati alla vaccinazione o alla precedente malattia. Tuttavia, la specificità della reazione Widal non è abbastanza alta, quindi l'applicazione preferita TPHA attivata, in cui la Diagnostico eritrociti sensibilizzati o (anticorpo O-rilevamento) O-, o Vi-antigene (per rilevare Vi-anticorpi). La più affidabile e specifica è l'ultima reazione (Vi-emoagglutinazione).

Diagnosi del trasporto batterico di tifo e paratifo

L'unica prova è l'isolamento di batteri dal mezzo di coltura S. Typhi, S. Paratyphi A, S. Paratyphi C. Il materiale per lo studio sono contenuti duodenale, feci e urina. La complessità del problema sta nel fatto che i portatori non sempre espellono con questi substrati, ci sono pause e abbastanza lungo. Come metodi controllate che consentono gamma ristretta di individui intervistati test sierologici uso (rilevazione simultanea O-, H-, Vi- o O, Vi-anticorpi indica la possibile presenza del patogeno nel corpo) e test cutaneo allergiche con Vi-Tifina River. Quest'ultimo contiene Vi-antigen, che quando interagisce con gli anticorpi Vi dà una reazione allergica locale sotto forma di arrossamento e gonfiore per 20-30 minuti. Una reazione positiva con Vi-typhin indica la presenza di anticorpi Vi nel corpo e la possibile presenza di S. Typhi. Per identificare le forme L di S. Typhi, vengono proposti anticorpi immunofluorescenti speciali (agli antigeni di L-forma del patogeno). V.Murom ha offerto un metodo originale per il rilevamento di portatori batterici. Consiste nello studio dei tamponi, gettati simultaneamente nella rete fognaria dell'intero insediamento.

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Trattamento della febbre tifoide e paratifo

Il trattamento della febbre tifoide si basa sull'uso di vari antibiotici, a cui i patogeni mostrano un'alta sensibilità (levomicetina, ampicillina, tetracicline, ecc.). Gli antibiotici riducono la gravità del decorso della malattia e riducono la sua durata. Tuttavia, il trasferimento di plasmidi R in salmonella da E. Coli o altri enterobatteri può portare alla comparsa di pericolosi cloni epidemici tra di loro.

Profilassi specifica di tifo e paratifo

Invece di sette diversi vaccini contro il tifo, usati in precedenza, dal 1978, ne è stato prodotto solo uno nel nostro paese: un monovalente addominale-tifoide con dolore chimico. Tuttavia, a causa del fatto che l'epidemia di tifo della malattia spostato nella categoria di sporadici (e questo è stato reso possibile soprattutto grazie al miglioramento dell'acqua e dei sistemi igienico-sanitari e migliorare la cultura sanitaria della popolazione), la necessità di immunizzazione di massa contro di lui è scomparso. Pertanto, l' inoculazione da febbre tifoide viene effettuata solo nel caso di indicazioni epidemiche.