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Salute

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Diagnosi di herpes

 
, Editor medico
Ultima recensione: 19.11.2021
 
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La diagnosi di herpes si basa sullo svolgimento del classico diffusione virale in colture cellulari sensibili, immunofluorescenza e metodi sierologici, la realizzazione di studi colposcopici con metodi biologico-molecolari moderni (PCR, dot-ibridazione), che consente di diagnosticare tutto il gruppo herpesvirus, tra cui HHV-6 e HHV-7 tipi.

Metodi di diagnosi di laboratorio di infezione erpetica

I principali metodi volti a secernere HSV o rilevare particelle virali e / o loro componenti

Metodi ausiliari volti a rilevare gli anticorpi contro HSV nei fluidi biologici del corpo umano

  1. Isolamento di HSV in colture sensibili di cellule e animali
  2. Microscopia elettronica diretta e immunitaria
  3. Opzioni MFA dirette e indirette
  4. IFA
  5. Metodi biologici molecolari
  6. Reazione di agglutinazione al lattice
  1. Reazione di neutralizzazione
  2. RSK
  3. Determinazione degli anticorpi contro proteine non strutturali di HSV-1,2

È stato dimostrato che il 76% dei pazienti ha l'herpes genitale (GH) causato da HSV-2 e nel 24% - tipo HSV-1. E GG come monoinfezione si è verificata solo nel 22% dei pazienti, nel 78% dei casi, sono state rilevate associazioni microbiche. Nel 46% dei pazienti è stata rilevata la parassitocenosi causata da due patogeni, inclusa la clamidia nel 40% dei casi. Meno spesso negli strisci determinati gardnerelly, Trichomonas, gonococci.

Nel 27% dei pazienti, la parassitocenosi era rappresentata da tre e il 5,2% da quattro patogeni. E più spesso c'era una combinazione di clamidia con funghi Gardnerella e Candida. Questi dati giustificano la necessità di un accurato esame batteriologico dei pazienti con GH al fine di identificare combinazioni di agenti patogeni, nonché uno studio approfondito della patogenesi di infezioni miste del tratto urogenitale, che consentirà una terapia differenziale complessa di infezione erpetica.

Materiali da studiare nell'isolamento di HSV a seconda della localizzazione delle lesioni erpetiche

Localizzazione di
lesioni

Contenuto di
vescicole

Rottame di cellule

SMZ

Aspirare dai bronchi

Biopsia

Sangue

1

2

3

4

Pelle

+

+

Occhi

+

+

Genitali

+

+

Ano

+

+

+

Bocca

+

+

+

CNS

+

+

+

+

Polmoni

+

+

+

Il fegato

+

+


Herpes congenito

+

+

+

+

+

Metodi di diagnosi di laboratorio dell'infezione da citomegalovirus

Metodi

Tempo necessario per ottenere risultati

Note

Virologico

Microscopia elettronica

3 ore

Malodostupen

Isolamento del virus nella coltura cellulare (CPD)

4-20 giorni

Standard,
lento

Colorazione immunofluorescente della prima AH con anticorpi monoclonali

6 ore

Meno
specifico

TSITOLOGICHESKIY

2-3 ore

Meno
specifico

SEROLOGICHESKIY

RSK

2 giorni

Standard

Ssubsistence

1 giorno

In termini di tempo

RIF

6 ore

Semplice,
specifico

NRIF

6 ore

Complesso

RIMF

6 ore

Complesso

IFA (IgM, TO)

6 ore

Veloce, semplice

Immunoblot

6 ore

Costoso

Di biologia molecolare

MG

5-7 giorni

Costoso,
richiede tempo

PCR

3 ore

Costoso

Metodi per diagnosticare il virus dell'herpes zoster

Metodi
diagnostici


Tecniche di laboratorio

INDIRETTI

Assegnazione

Cultura tessile, embrioni di pollo, animali da laboratorio, co-coltivazione con cellule permissive o virus helper

Identificazione di isolati

Reazione di neutralizzazione, DSC, IF, IPPE, reazione di isolati precipitati, agglutinazione, IF

DIRITTO

Citologia

Strisci: colore immunofluorescenza

Istologia

Patomorfologia della cellula

Struttura

Microscopia embrionale, microscopia immunoelettronica

Determinazione degli antigeni

SE, PIÉF, RIM, IFA

Determinazione della produzione locale di anticorpi

Ig M, Ig G, Ig A: IFA, RIA

Approcci biologici molecolari

Ibridazione molecolare, PCR

Diagnosi di laboratorio dell'infezione causata dal virus dell'herpes zoster


Problemi diagnostici

Metodi

Risultati attesi

Infezione primaria acuta

1

Rilevazione dopo 2 ore

2

Il livello di anticorpi cresce lentamente

3

Presente 3 giorni dopo l'infezione

Infezione acuta
riattivata

1

Rilevazione di ULV in 2 ore

2

Il livello di anticorpi cresce lentamente

4

Presente 4 giorni dopo la comparsa di eruzioni cutanee

  1. la determinazione nel fluido delle vescicole del WIEF;
  2. sierologia: DSC, ELISA, finalizzato all'individuazione
  3. Sierologia: ELISA, finalizzato alla rilevazione di IgM;
  4. sierologia: ELISA, finalizzato alla rilevazione di IgA, IgM.

Metodi per indicare la risposta immunitaria di un'infezione dovuta al virus dell'herpes zoster

Approccio

Metodo

Rilevazione di un aumento del titolo anticorpale nel secondo siero

RSK, RTGA, RPGA, reazione di neutralizzazione IF, RIM, ELISA

Rilevazione di anticorpi IgG specifici per classe IgG nel primo campione di siero

IFA, IF, RIM, agglutinazione al lattice

Interpretazione dei risultati dell'esame sierologico dei sieri dei pazienti su infezioni da herpesvirus (ELISA)

Nome
dell'infezione / marker

Soglie medie per le infezioni

Risultati dell'analisi

Interpretazione

Cytomegaly Anti-CMV IgG (1-20 E / ml)

Anti-CMV IgM (100-300%)

1-6 6-10 positiva positiva positiva> 10
Negativo
Positivo Negativo 100-300 <90 Dubbioso 90-100

Remissione
Aggravamento della malattia
Fase acuta della malattia
Nessuna infezione (malattia)
Fase acuta della malattia
Ripetere l'analisi dopo 2-3 settimane

Herpes semplice 1,2 sierotipi
Anti-HSV 1/2 totale. (100-900%)

Positivo 100-400 Positivo 400-800 Positivo> 800
Negativo <100

Remissione
Aggravamento della malattia
Fase acuta della malattia
Nessuna infezione (malattia)

La tabella presenta i principali metodi di diagnostica di laboratorio delle infezioni da herpes virus e raccomanda anche materiali biologici studiati nell'isolamento di HSV, tenendo conto della localizzazione delle lesioni erpetiche

Affidabile è l'assegnazione di herpes simplex e CMV attraverso l'infezione di colture cellulari sensibili. Pertanto, nell'esame virologico di 26 pazienti nel periodo di recidiva, HSV è stato isolato su una coltura di cellule Vero sensibili in 23 casi (88,4%). Nelle colture infette, è stato osservato un pattern di azione citopatica caratteristica dell'HSV: la formazione di cellule giganti multinucleate o l'accumulo di cellule arrotondate e ingrandite sotto forma di mazzi. Nel 52,1% dei casi, è stato possibile rilevare i fuochi dell'effetto citopatico del virus entro 16-24 ore dall'infezione. Per 48-72 ore di incubazione di colture infette, la percentuale di materiali che causa la distruzione cellulare specifica è aumentata all'87%. E solo nel 13% dei casi, i risultati positivi sono stati rilevati 96 ore dopo l'infezione e più o con ripetuti passaggi.

Metodi di diagnosi di laboratorio di infezione herpetica generalizzata

I principali metodi mirati alla rilevazione (isolamento) di herpesvirus, loro particelle e loro componenti

Metodi ausiliari volti a rilevare anticorpi anti-herpes virus in fluidi biologici, rilevando spostamenti enzimatici nel siero del sangue

Isolamento del virus Herpes su colture cellulari sensibili e animale
microscopia elettronica diretta e immunitario
metodo dell'immunoperossidasi diretta e indiretta forme di realizzazione dirette ed indirette mangiare tecnica di immunofluorescenza
mangiare ELISA
forme di realizzazione molecolare (DNA-DNA) ibridano
Polymerase Chain Reaction
agglutinazione di lattice Reaction

Neutralizzazione
reazione di fissazione del complemento
reazione di agglutinazione di lattice
indiretta fluorescente metodo anticorpo realizzazione
indiretto metodo dell'immunoperossidasi variante
Forme ELISA
Metodo immuni assorbente
radiale fissazione del complemento Metodo
Determinazione dei livelli di alanina e aspartato

Per diagnosticare la mononucleosi infettiva (infezione causata da VEB), vengono utilizzati metodi sierologici. La reazione di Paul Bunnel con eritrociti di una ram, un titolo diagnostico di 1:28 e più alto con un singolo studio di siero, o un aumento di 4 volte di anticorpi nell'esame di sieri accoppiati. Utilizzare la reazione Goff-Bauer con una sospensione di globuli rossi formalizzati al 4% del cavallo. Il risultato è preso in considerazione dopo 2 minuti, con la mononucleosi infettiva la reazione è altamente specifica.

Attualmente è in fase di sviluppo un test immunoenzimatico (ELISA) per diagnosticare la mononucleosi infettiva. In questo caso, gli anticorpi IgG e IgM nel siero del paziente vengono determinati incubandolo con linfoblasti infettati da EBV, seguito dal trattamento con anticorpi fluorescenti. Nel periodo acuto della malattia, gli anticorpi diretti contro l'antigene del capside virale sono determinati in un titolo di 1: 160 o superiore.

Quando si utilizza un certo numero di sistemi di test commerciali importati in IFA può identificare: anticorpi anti formica anticorpi busta Egan EBV per antigene precoce di EBV, l'anticorpo generale ad un antigene precoce di EBV, determinato nella fase acuta della malattia e nel nucleo e nel citoplasma, e l'anticorpo limitata EBV presto, determinato nella fase acuta della malattia e nel nucleo e nel citoplasma delle cellule, delimitata anticorpi anti EBV presto l'antigene, determinati nel mezzo della malattia solo nel citoplasma delle cellule, e anticorpi per EBV antigene nucleare. L'uso di questi sistemi di test consente la diagnosi differenziale di un numero di malattie associate all'EBV.

Dopo ELISA positivo per identificare gli anticorpi EBV danno immunoblot risposta di conferma, che rilevano la presenza di anticorpi per separare proteine marker EBV (p-proteine): P23, P54, P72 (la presenza della proteina suggerisce la possibilità di riproduzione EBV), p 138. Detto sopra i metodi di laboratorio sono usati per controllare l'efficacia del trattamento.

La sensibilità dei metodi virologici è dell'85-100%, la specificità è del 100%, il tempo di studio è di 2-5 giorni. Spesso nella pratica viene utilizzato il metodo di immunofluorescenza diretta (PIF) con anticorpi policlonali o monoclonali contro HSV-1 e HSV-2. Il metodo UIF può essere facilmente riprodotto in un laboratorio clinico convenzionale, non è costoso, la sensibilità è superiore all'80%, la specificità è del 90-95%. La microscopia ad immunofluorescenza ha rivelato la presenza di inclusioni citoplasmatiche, caratteristiche morfologiche, percentuale di cellule infette in strisci e raschiature dall'uretra, dal canale cervicale, dalla cervice, dal retto.

Il metodo UIF dà un'idea delle proprietà morfologiche delle cellule e dei cambiamenti nella localizzazione degli antigeni dell'HSV. Oltre ai segni diretti di danno cellulare da virus herpes (rilevamento di luminescenza specifica), ci sono segni indiretti di infezione da herpetic secondo i dati UIF:

  • aggregazione di materia nucleare, esfoliazione di karyoolma;
  • presenza del cosiddetto. Nuclei "buchi", quando rimane solo un karyolemma dal nucleo della cellula;
  • la presenza di inclusioni intranucleari - il vitello di Caudry.

Quando si imposta il medico UIF riceve non solo la qualità, ma anche una valutazione quantitativa delle cellule infette che siamo stati utilizzati per valutare l'efficacia della terapia antivirale con acyclovir (AC). Così, 80 pazienti con herpes genitale semplice (GG) sono stati esaminati dal metodo UIF in dinamica. E 'dimostrato che se, prima del trattamento con acyclovir negli strisci 88% dei pazienti aveva una elevata percentuale di cellule infettate (50-75% e oltre), dopo un ciclo di aciclovir negli strisci 44% dei pazienti con cellule sane rilevate nel 31% dei casi sono contrassegnati singole cellule infette e Il 25% dei pazienti aveva fino al 10% di cellule infette.

Il contenuto di cellule infette in strisci (reazione PIF) di pazienti con herpes genitale, trattati con aciclovir

Periodi di malattia

Percentuale di sbavature

Cellule infette


cellule normali

Oltre il
75%

50-75%

40-50%

10%

Singole celle in n / sp

Recidiva (prima del trattamento)

25%

63%

12%

(20)

(50)

(10)

Remissione (dopo il trattamento)

25%

31%

44%

(20)

(25)

(35)

Usando molti anni di UIF e il metodo dell'ibridazione del punto, quasi il 100% dei casi ha coinciso con i risultati dello studio. Va notato che, per aumentare l'affidabilità della diagnosi di GH, in particolare nei casi in cui v'è subclinica e forme malomanifestnyh di herpes, si raccomanda di utilizzare il metodo di diagnosi di laboratorio 2-3, specialmente quando si esaminano le donne in gravidanza, donne con storia ostetrica svantaggiati, le persone con diagnosi ginecologica specificato.

Quindi, quando la diagnosi PCR delle infezioni virali-batteriche del tratto urogenitale, è necessario valutare i risultati positivi ottenuti prendendo in considerazione l'anamnesi, la presenza (o l'assenza) di specifici sintomi clinici della malattia. Se la Chlamydia viene rilevata con la PCR, allora in questo caso è possibile parlare di infezione e risolvere i problemi della terapia di conseguenza. Nel caso di rilevamento di micoplasmi (ureaplasmas), che sono microrganismi opportunistici, sono necessari ulteriori studi colturali per confermare la diagnosi, cioè la semina del materiale dal paziente a colture cellulari sensibili. Solo quando si ottengono risultati positivi nell'analisi della cultura possiamo parlare di conferma di laboratorio della diagnosi di micoplasmosi. Lo stesso metodo consentirà, se necessario, di determinare la sensibilità dei micoplasmi isolati alle forme medicinali frequentemente utilizzate (antibiotici, fluorochinoloni, ecc.).

Forse un'infezione in una fase con diversi virus della famiglia Nepresviridae. Spesso abbiamo rilevato un'infezione di un paziente con virus HSV-1, HSV-2 e CMV. Molto più spesso infettati da numerosi virus dell'herpes erano i pazienti con manifestazioni cliniche e di laboratorio di IDS secondaria (pazienti con oncoematologia, oncologia, infezione da HIV). Pertanto, è dimostrato che i disordini clinici e immunologici che progrediscono con l'infezione da HIV sono accompagnati da un aumento del numero di herpesvirus rilevati dall'ibridazione molecolare. In questo prognosticamente più significativo può essere considerato un complesso rilevamento in una fase del DNA di tipo HSV-1, CMV e HHV-6.

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