Diagnosi di herpes

La diagnosi di herpes si basa sullo svolgimento del classico diffusione virale in colture cellulari sensibili, immunofluorescenza e metodi sierologici, la realizzazione di studi colposcopici con metodi biologico-molecolari moderni (PCR, dot-ibridazione), che consente di diagnosticare tutto il gruppo herpesvirus, tra cui HHV-6 e HHV-7 tipi.

Metodi di diagnosi di laboratorio di infezione erpetica

I principali metodi volti a secernere HSV o rilevare particelle virali e / o loro componenti	Metodi ausiliari volti a rilevare gli anticorpi contro HSV nei fluidi biologici del corpo umano
Isolamento di HSV in colture sensibili di cellule e animali Microscopia elettronica diretta e immunitaria Opzioni MFA dirette e indirette IFA Metodi biologici molecolari Reazione di agglutinazione al lattice	Reazione di neutralizzazione RSK Determinazione degli anticorpi contro proteine non strutturali di HSV-1,2

È stato dimostrato che il 76% dei pazienti ha l'herpes genitale (GH) causato da HSV-2 e nel 24% - tipo HSV-1. E GG come monoinfezione si è verificata solo nel 22% dei pazienti, nel 78% dei casi, sono state rilevate associazioni microbiche. Nel 46% dei pazienti è stata rilevata la parassitocenosi causata da due patogeni, inclusa la clamidia nel 40% dei casi. Meno spesso negli strisci determinati gardnerelly, Trichomonas, gonococci.

Nel 27% dei pazienti, la parassitocenosi era rappresentata da tre e il 5,2% da quattro patogeni. E più spesso c'era una combinazione di clamidia con funghi Gardnerella e Candida. Questi dati giustificano la necessità di un accurato esame batteriologico dei pazienti con GH al fine di identificare combinazioni di agenti patogeni, nonché uno studio approfondito della patogenesi di infezioni miste del tratto urogenitale, che consentirà una terapia differenziale complessa di infezione erpetica.

Materiali da studiare nell'isolamento di HSV a seconda della localizzazione delle lesioni erpetiche

Localizzazione di lesioni	Contenuto di vescicole	Rottame di cellule				SMZ	Aspirare dai bronchi	Biopsia	Sangue
		1	2	3	4
Pelle	+								+
Occhi			+						+
Genitali				+					+
Ano	+				+				+
Bocca	+	+							+
CNS	+					+		+	+
Polmoni		+					+		+
Il fegato								+	+
Herpes congenito	+	+	+				+		+

Metodi di diagnosi di laboratorio dell'infezione da citomegalovirus

Metodi	Tempo necessario per ottenere risultati	Note
Virologico
Microscopia elettronica	3 ore	Malodostupen
Isolamento del virus nella coltura cellulare (CPD)	4-20 giorni	Standard, lento
Colorazione immunofluorescente della prima AH con anticorpi monoclonali	6 ore	Meno specifico
TSITOLOGICHESKIY	2-3 ore	Meno specifico
SEROLOGICHESKIY
RSK	2 giorni	Standard
Ssubsistence	1 giorno	In termini di tempo
RIF	6 ore	Semplice, specifico
NRIF	6 ore	Complesso
RIMF	6 ore	Complesso
IFA (IgM, TO)	6 ore	Veloce, semplice
Immunoblot	6 ore	Costoso
Di biologia molecolare
MG	5-7 giorni	Costoso, richiede tempo
PCR	3 ore	Costoso

Metodi per diagnosticare il virus dell'herpes zoster

Metodi diagnostici	Tecniche di laboratorio
INDIRETTI
Assegnazione	Cultura tessile, embrioni di pollo, animali da laboratorio, co-coltivazione con cellule permissive o virus helper
Identificazione di isolati	Reazione di neutralizzazione, DSC, IF, IPPE, reazione di isolati precipitati, agglutinazione, IF
DIRITTO
Citologia	Strisci: colore immunofluorescenza
Istologia	Patomorfologia della cellula
Struttura	Microscopia embrionale, microscopia immunoelettronica
Determinazione degli antigeni	SE, PIÉF, RIM, IFA
Determinazione della produzione locale di anticorpi	Ig M, Ig G, Ig A: IFA, RIA
Approcci biologici molecolari	Ibridazione molecolare, PCR

Diagnosi di laboratorio dell'infezione causata dal virus dell'herpes zoster

Problemi diagnostici	Metodi	Risultati attesi
Infezione primaria acuta	1	Rilevazione dopo 2 ore
	2	Il livello di anticorpi cresce lentamente
	3	Presente 3 giorni dopo l'infezione
Infezione acuta riattivata	1	Rilevazione di ULV in 2 ore
	2	Il livello di anticorpi cresce lentamente
	4	Presente 4 giorni dopo la comparsa di eruzioni cutanee

1. la determinazione nel fluido delle vescicole del WIEF;
2. sierologia: DSC, ELISA, finalizzato all'individuazione
3. Sierologia: ELISA, finalizzato alla rilevazione di IgM;
4. sierologia: ELISA, finalizzato alla rilevazione di IgA, IgM.

Metodi per indicare la risposta immunitaria di un'infezione dovuta al virus dell'herpes zoster

Approccio	Metodo
Rilevazione di un aumento del titolo anticorpale nel secondo siero	RSK, RTGA, RPGA, reazione di neutralizzazione IF, RIM, ELISA
Rilevazione di anticorpi IgG specifici per classe IgG nel primo campione di siero	IFA, IF, RIM, agglutinazione al lattice

Interpretazione dei risultati dell'esame sierologico dei sieri dei pazienti su infezioni da herpesvirus (ELISA)

Nome dell'infezione / marker	Soglie medie per le infezioni
	Risultati dell'analisi	Interpretazione
Cytomegaly Anti-CMV IgG (1-20 E / ml) Anti-CMV IgM (100-300%)	1-6 6-10 positiva positiva positiva> 10 Negativo Positivo Negativo 100-300 <90 Dubbioso 90-100	Remissione Aggravamento della malattia Fase acuta della malattia Nessuna infezione (malattia) Fase acuta della malattia Ripetere l'analisi dopo 2-3 settimane
Herpes semplice 1,2 sierotipi Anti-HSV 1/2 totale. (100-900%)	Positivo 100-400 Positivo 400-800 Positivo> 800 Negativo <100	Remissione Aggravamento della malattia Fase acuta della malattia Nessuna infezione (malattia)

La tabella presenta i principali metodi di diagnostica di laboratorio delle infezioni da herpes virus e raccomanda anche materiali biologici studiati nell'isolamento di HSV, tenendo conto della localizzazione delle lesioni erpetiche

Affidabile è l'assegnazione di herpes simplex e CMV attraverso l'infezione di colture cellulari sensibili. Pertanto, nell'esame virologico di 26 pazienti nel periodo di recidiva, HSV è stato isolato su una coltura di cellule Vero sensibili in 23 casi (88,4%). Nelle colture infette, è stato osservato un pattern di azione citopatica caratteristica dell'HSV: la formazione di cellule giganti multinucleate o l'accumulo di cellule arrotondate e ingrandite sotto forma di mazzi. Nel 52,1% dei casi, è stato possibile rilevare i fuochi dell'effetto citopatico del virus entro 16-24 ore dall'infezione. Per 48-72 ore di incubazione di colture infette, la percentuale di materiali che causa la distruzione cellulare specifica è aumentata all'87%. E solo nel 13% dei casi, i risultati positivi sono stati rilevati 96 ore dopo l'infezione e più o con ripetuti passaggi.

Metodi di diagnosi di laboratorio di infezione herpetica generalizzata

I principali metodi mirati alla rilevazione (isolamento) di herpesvirus, loro particelle e loro componenti	Metodi ausiliari volti a rilevare anticorpi anti-herpes virus in fluidi biologici, rilevando spostamenti enzimatici nel siero del sangue
Isolamento del virus Herpes su colture cellulari sensibili e animale microscopia elettronica diretta e immunitario metodo dell'immunoperossidasi diretta e indiretta forme di realizzazione dirette ed indirette mangiare tecnica di immunofluorescenza mangiare ELISA forme di realizzazione molecolare (DNA-DNA) ibridano Polymerase Chain Reaction agglutinazione di lattice Reaction	Neutralizzazione reazione di fissazione del complemento reazione di agglutinazione di lattice indiretta fluorescente metodo anticorpo realizzazione indiretto metodo dell'immunoperossidasi variante Forme ELISA Metodo immuni assorbente radiale fissazione del complemento Metodo Determinazione dei livelli di alanina e aspartato

Per diagnosticare la mononucleosi infettiva (infezione causata da VEB), vengono utilizzati metodi sierologici. La reazione di Paul Bunnel con eritrociti di una ram, un titolo diagnostico di 1:28 e più alto con un singolo studio di siero, o un aumento di 4 volte di anticorpi nell'esame di sieri accoppiati. Utilizzare la reazione Goff-Bauer con una sospensione di globuli rossi formalizzati al 4% del cavallo. Il risultato è preso in considerazione dopo 2 minuti, con la mononucleosi infettiva la reazione è altamente specifica.

Attualmente è in fase di sviluppo un test immunoenzimatico (ELISA) per diagnosticare la mononucleosi infettiva. In questo caso, gli anticorpi IgG e IgM nel siero del paziente vengono determinati incubandolo con linfoblasti infettati da EBV, seguito dal trattamento con anticorpi fluorescenti. Nel periodo acuto della malattia, gli anticorpi diretti contro l'antigene del capside virale sono determinati in un titolo di 1: 160 o superiore.

Quando si utilizza un certo numero di sistemi di test commerciali importati in IFA può identificare: anticorpi anti formica anticorpi busta Egan EBV per antigene precoce di EBV, l'anticorpo generale ad un antigene precoce di EBV, determinato nella fase acuta della malattia e nel nucleo e nel citoplasma, e l'anticorpo limitata EBV presto, determinato nella fase acuta della malattia e nel nucleo e nel citoplasma delle cellule, delimitata anticorpi anti EBV presto l'antigene, determinati nel mezzo della malattia solo nel citoplasma delle cellule, e anticorpi per EBV antigene nucleare. L'uso di questi sistemi di test consente la diagnosi differenziale di un numero di malattie associate all'EBV.

Dopo ELISA positivo per identificare gli anticorpi EBV danno immunoblot risposta di conferma, che rilevano la presenza di anticorpi per separare proteine marker EBV (p-proteine): P23, P54, P72 (la presenza della proteina suggerisce la possibilità di riproduzione EBV), p 138. Detto sopra i metodi di laboratorio sono usati per controllare l'efficacia del trattamento.

La sensibilità dei metodi virologici è dell'85-100%, la specificità è del 100%, il tempo di studio è di 2-5 giorni. Spesso nella pratica viene utilizzato il metodo di immunofluorescenza diretta (PIF) con anticorpi policlonali o monoclonali contro HSV-1 e HSV-2. Il metodo UIF può essere facilmente riprodotto in un laboratorio clinico convenzionale, non è costoso, la sensibilità è superiore all'80%, la specificità è del 90-95%. La microscopia ad immunofluorescenza ha rivelato la presenza di inclusioni citoplasmatiche, caratteristiche morfologiche, percentuale di cellule infette in strisci e raschiature dall'uretra, dal canale cervicale, dalla cervice, dal retto.

Il metodo UIF dà un'idea delle proprietà morfologiche delle cellule e dei cambiamenti nella localizzazione degli antigeni dell'HSV. Oltre ai segni diretti di danno cellulare da virus herpes (rilevamento di luminescenza specifica), ci sono segni indiretti di infezione da herpetic secondo i dati UIF:

• aggregazione di materia nucleare, esfoliazione di karyoolma;
• presenza del cosiddetto. Nuclei "buchi", quando rimane solo un karyolemma dal nucleo della cellula;
• la presenza di inclusioni intranucleari - il vitello di Caudry.

Quando si imposta il medico UIF riceve non solo la qualità, ma anche una valutazione quantitativa delle cellule infette che siamo stati utilizzati per valutare l'efficacia della terapia antivirale con acyclovir (AC). Così, 80 pazienti con herpes genitale semplice (GG) sono stati esaminati dal metodo UIF in dinamica. E 'dimostrato che se, prima del trattamento con acyclovir negli strisci 88% dei pazienti aveva una elevata percentuale di cellule infettate (50-75% e oltre), dopo un ciclo di aciclovir negli strisci 44% dei pazienti con cellule sane rilevate nel 31% dei casi sono contrassegnati singole cellule infette e Il 25% dei pazienti aveva fino al 10% di cellule infette.

Il contenuto di cellule infette in strisci (reazione PIF) di pazienti con herpes genitale, trattati con aciclovir

Periodi di malattia	Percentuale di sbavature
	Cellule infette					cellule normali
	Oltre il 75%	50-75%	40-50%	10%	Singole celle in n / sp
Recidiva (prima del trattamento)	25%	63%	12%
	(20)	(50)	(10)
Remissione (dopo il trattamento)				25%	31%	44%
				(20)	(25)	(35)

Usando molti anni di UIF e il metodo dell'ibridazione del punto, quasi il 100% dei casi ha coinciso con i risultati dello studio. Va notato che, per aumentare l'affidabilità della diagnosi di GH, in particolare nei casi in cui v'è subclinica e forme malomanifestnyh di herpes, si raccomanda di utilizzare il metodo di diagnosi di laboratorio 2-3, specialmente quando si esaminano le donne in gravidanza, donne con storia ostetrica svantaggiati, le persone con diagnosi ginecologica specificato.

Quindi, quando la diagnosi PCR delle infezioni virali-batteriche del tratto urogenitale, è necessario valutare i risultati positivi ottenuti prendendo in considerazione l'anamnesi, la presenza (o l'assenza) di specifici sintomi clinici della malattia. Se la Chlamydia viene rilevata con la PCR, allora in questo caso è possibile parlare di infezione e risolvere i problemi della terapia di conseguenza. Nel caso di rilevamento di micoplasmi (ureaplasmas), che sono microrganismi opportunistici, sono necessari ulteriori studi colturali per confermare la diagnosi, cioè la semina del materiale dal paziente a colture cellulari sensibili. Solo quando si ottengono risultati positivi nell'analisi della cultura possiamo parlare di conferma di laboratorio della diagnosi di micoplasmosi. Lo stesso metodo consentirà, se necessario, di determinare la sensibilità dei micoplasmi isolati alle forme medicinali frequentemente utilizzate (antibiotici, fluorochinoloni, ecc.).

Forse un'infezione in una fase con diversi virus della famiglia Nepresviridae. Spesso abbiamo rilevato un'infezione di un paziente con virus HSV-1, HSV-2 e CMV. Molto più spesso infettati da numerosi virus dell'herpes erano i pazienti con manifestazioni cliniche e di laboratorio di IDS secondaria (pazienti con oncoematologia, oncologia, infezione da HIV). Pertanto, è dimostrato che i disordini clinici e immunologici che progrediscono con l'infezione da HIV sono accompagnati da un aumento del numero di herpesvirus rilevati dall'ibridazione molecolare. In questo prognosticamente più significativo può essere considerato un complesso rilevamento in una fase del DNA di tipo HSV-1, CMV e HHV-6.

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