Immunofenotipizzazione di emoblastosi

Progressi significativi in studi ematologiche associate negli ultimi anni con l'uso di metodi immunologici moderni e strumenti automatizzati per l'analisi e l'ordinamento delle cellule del sangue periferico e midollo osseo - citometri di flusso. Morfologica tradizionale e lo studio citochimiche della malattia delle cellule substrato (sangue, midollo osseo rosso, linfonodi, milza, ecc), in molti casi, soprattutto nelle malattie linfoproliferative, non rivelano tutta la varietà di opzioni tra le forme morfologicamente simili e identificare l'origine del clone patologico . Questi problemi possono essere risolti solo studiando le caratteristiche immunologiche delle cellule. Ogni fase della differenziazione delle cellule ematopoietiche ha una propria serie di antigeni che si trovano sulla classificazione internazionale conosciuto come la differenziazione e la differenziazione sono divisi in gruppi, CD designato.

Nel blocco differenziazione delle alterazioni neoplastiche possono verificarsi in qualsiasi fase dello sviluppo delle cellule normali, risultando in un clone cellulare patologica definire malattia substrato ed avente la caratteristica stessa immunologica (o fenotipica). Dopo uno studio di questi marcatori in cellule può essere determinata mediante qualsiasi forma o realizzazione della malattia sono coerenti, ossia sulla base di immunologica diagnosi fenotipo cellulare differenziale, che è la più difficile in malattie linfoproliferative, perché le malattie patologiche substrato cellulare principale sono quasi lo stesso tipo di cellule morfologicamente.

La fenotipizzazione consente la tipizzazione di cellule del sangue blasto e maturo delle serie mielo-, mono- e linfocitiche utilizzando anticorpi monoclonali mediante la presenza di antigeni di differenziazione (recettori) nella parete cellulare. Nella sezione "Valutazione dello stato immunitario dell'organismo", le caratteristiche e il significato diagnostico dei marcatori cellulari sono parzialmente descritti; Di seguito una breve descrizione dei marcatori di cellule antigeniche applicati alla diagnosi di emoblastosi. Sulle membrane dei globuli rossi e del midollo osseo rosso possono essere identificati i seguenti antigeni (marcatori).

• CD2 è una glicoproteina transmembrana monomerica. È presente sulla superficie di tutti i linfociti T circolanti e di alcuni linfociti NK. CD2 partecipa al processo di attivazione alternativa dei linfociti T. La rilevazione di CD2 utilizzando anticorpi monoclonali nella pratica clinica è utilizzata per la fenotipizzazione di leucemie acute delle cellule T, linfomi, condizioni infiammatorie croniche e immunodeficienti.
• CD3 - un complesso proteico associato a un recettore di cellule T antigene-specifico, è il principale marcatore funzionale dei linfociti T. Facilita il trasferimento del segnale di attivazione dalla membrana al citoplasma della cellula. Il rilevamento di CD3 è indicato per la diagnosi di leucemia a cellule T acute, linfoma (CD3 non è espresso nei tumori linfoidi non a cellule T) e malattie da immunodeficienza.
• CD4 - glicoproteina transmembrana espressa da un sottoinsieme di T helper (induttori) costituisce il 45% dei linfociti del sangue periferico. Nelle prime fasi di sviluppo dei linfociti nel timo, antigeni CD4, nonché di CD8, hanno espresso tutti i linfociti corticali. Timociti midollari, che è simile al fenotipo maturo CD4 + cellule T del sangue periferico (cellule T helper), sia già esprimono CD4, CD8 o recettori. Nel sangue periferico, fino al 5% delle cellule sono simultaneamente etichettati come CD4 e CD8. Una leggera espressione di CD4 è possibile su alcune cellule di monociti. CD4 è espresso in maggior parte dei casi, il linfoma delle cellule T, tra cui micosi fungoide, e in HTLV-associata leucemia a cellule T (HTLV - T-lymphotropic virus umano - HTLV).
• CD5 - una glicoproteina a catena singola, presente su tutti i linfociti T maturi e la maggior parte dei timociti, è debolmente espressa dai linfociti B. Il CD5 viene rilevato su cellule neoplastiche della leucemia linfatica cronica a cellule B e del linfoma centro-criptico. In altri tipi di malattie linfoidi maligne - linfoma follicolare, leucemia a cellule capellute, linfoma a grandi cellule - CD5 non è espresso.
• CD7 è una proteina a filamento singolo, il primo marker della differenziazione delle cellule T. È espresso dai linfociti pro-T ancora prima che migrino verso il timo. Il CD7 viene rilevato sulla maggior parte delle cellule NK, l'espressione debole viene annotata sui monociti. I linfociti B e i granulociti non contengono questo antigene. La definizione di CD7 è utilizzata per la diagnosi di linfomi, leucemia linfoblastica a cellule T da bambini.
• CD8 è una proteina costituita da due catene polipeptidiche collegate da ponti disolfuro. È espresso da una sottopopolazione di linfociti T citotossici e soppressori, che comprendono il 20-35% dei linfociti del sangue periferico. Questo antigene ha anche linfociti NK, timociti corticali, il 30% dei timociti midollari e una sottopopolazione di cellule del midollo osseo rosso. Il CD8 viene esaminato per la valutazione quantitativa del contenuto di soppressori del T (vedere la sezione "T-linfociti-soppressori nel sangue" sopra).

• CD10 è l'endopeptidasi associata alla membrana cellulare. CD10 esprime forme giovani di linfociti B e una sottopopolazione di linfociti corticali. CD10 esprime tutte le celle di ALL.
• CD11c esprimono macrofagi, monociti, granulociti, cellule NK e cellule della leucemia a cellule capellute sulla membrana cellulare.
• CD13 è una glicoproteina espressa dalle cellule mielomonocitiche (cellule progenitrici, neutrofili, basofili, eosinofili, monociti e cellule leucemiche mieloidi). È assente nei linfociti T e B, negli eritrociti e nelle piastrine.
• CD14 è una glicoproteina di membrana di superficie. È espresso principalmente da monociti e macrofagi. Il CD14 viene rilevato in oltre il 95% di monociti di sangue periferico e midollo osseo. Forte espressione di CD14 è stata osservata nella leucemia mieloblastica acuta. Nella leucemia linfoblastica acuta e cronica, questo antigene non è espresso.
• CD15 è un oligosaccaride. Prende parte ai processi di fagocitosi e chemiotassi. Questo antigene è presente sulla superficie dei granulociti maturi e delle cellule di Berezovsky-Sternberg. L'espressione dell'antigene CD15 viene rilevata nella malattia di Hodgkin. Nei linfomi non Hodgkin, CD15 non viene rilevato nella maggior parte dei casi.
• CD16 è espresso sulla superficie di granulociti, monociti, macrofagi e cellule NK. Tutti i linfociti che esprimono questo antigene hanno la capacità di citotossicità cellulare anticorpo-dipendente. CD16 è determinato quando si digitano leucemie mielocitiche croniche, per caratterizzare le cellule NK.
• CD19 è una glicoproteina presente su tutti i linfociti B periferici, nonché su tutti i precursori delle cellule B. È assente nelle plasmacellule. Questo è il primo marker delle cellule B, svolge un ruolo importante nella regolazione dell'attivazione e della proliferazione dei linfociti B. Il CD19 è espresso su tutte le cellule neoplastiche della leucemia acuta di origine delle cellule B ed è presente anche in alcune forme di leucemia acuta monoblastica.
• CD20 è una proteina non glicosilata. Nell'ontogenesi dei linfociti B, l'antigene CD20 appare dopo CD19 nella fase di differenziazione pre-B-cellulare dei linfociti. È assente sulla membrana plasmatica delle plasmacellule. È espresso in TUTTI, leucemia linfocitica cronica a cellule B, leucemia a cellule capellute, linfoma di Burkitt e molto raramente nella leucemia acuta monoblastica.
• CD21 è una glicoproteina, in quantità significativa è presente nei linfociti B negli organi linfoidi e in piccola quantità sulle cellule B del sangue periferico. CD21 è un recettore per il virus Epstein-Barr.
• CD22 è una proteina costituita da due catene polipeptidiche. È espresso sulla membrana della maggior parte dei linfociti B, comprese le cellule progenitrici (prolinfociti). L'antigene non è espresso sui linfociti B (plasmacellule) dopo la loro attivazione. L'espressione più pronunciata di CD22 è rilevata su cellule con leucemia a cellule capellute, deboli - nelle leucemie mieloidi e nei linfociti T non-cellulari.
• CD23 è una glicoproteina espressa dai linfociti B attivati del sangue periferico in misura molto maggiore. CD23 media citotossicità IgE-dipendente e fagocitosi da macrofagi ed eosinofili.
• CD25 è una glicoproteina a catena singola identificata come recettore a bassa affinità per IL-2. Questo recettore è espresso su linfociti T attivati e, a una densità inferiore, su cellule B attivate. Nel sangue periferico di persone sane, l'antigene è presente in più del 5% delle cellule linfoidi.
• CD29 è un recettore della fibronectina. È ampiamente distribuito nei tessuti, è espresso dai leucociti. Il rilevamento di CD29 su cellule del sangue periferico viene utilizzato per tipificare una sottopopolazione di cellule T aventi un fenotipo CD4 + CD29 +, chiamato helper type 2 (Th2). Queste cellule, attraverso la produzione di linfochine, partecipano alla realizzazione della risposta immunitaria umorale.
• CD33 è una glicoproteina transmembrana. È presente sulla superficie delle cellule della serie mieloide e monocitica. Si trova sulla superficie dei monociti e, in misura minore, dei granulociti di sangue periferico. Circa il 30% delle cellule del midollo osseo rosso esprimono CD33, inclusi mieloblasti, promielociti e mielociti. L'antigene è assente sulle membrane delle cellule staminali pluripotenti. CD33 è usato per caratterizzare le cellule nelle leucemie mieloidi. Le cellule leucemiche di origine linfoide ed eritroide non esprimono CD33.
• CD34 è una fosfoglicoproteina, espressa dalle cellule progenitrici ematopoietiche, comprese le cellule staminali monopotenti. L'espressione più pronunciata di Ar è osservata nei progenitori precoci; quando le cellule maturano, l'espressione del marcatore cade. Il CD34 si trova anche sulle cellule endoteliali. CD34 è usato per caratterizzare le cellule in leucemia mieloide e linfoblastica acuta. Con leucemia linfatica cronica e linfomi, l'espressione dell'antigene CD34 non viene rilevata.

• CD41a è espresso da piastrine e megacariociti. Anticorpi monoclonali per il rilevamento di CD41a sono usati per diagnosticare la leucemia megacarioblastica. Con Glązmann trombastenia, l'espressione di questo antigene è assente o significativamente soppressa.
• CD42b è una glicoproteina di membrana costituita da due catene polipeptidiche. Il marcatore si trova sulla superficie delle piastrine e dei megacariociti. Nella pratica clinica, la diagnosi di CD42b viene utilizzata per diagnosticare la trombocitopatia - sindrome di Bernard-Soulier.
• CD45RA appartiene alla classe delle glicoproteine transmembrana. Questo è un antigene leucocitario comune. Si esprime sulla membrana cellulare dei linfociti B, in misura minore sui linfociti T e sui timociti midollari maturi. Il marcatore non è espresso dai granulociti.
• CD45RO è una isoforma a basso peso molecolare di CD45RA - un leucocita comune. Si trovano su linfociti T (linfociti T di memoria), sottopopolazioni di linfociti B, monociti e macrofagi. Gli anticorpi monoclonali contro CD45RO interagiscono con la maggior parte dei timociti, una sottopopolazione di linfociti T CD4 + e CD8 + in riposo e cellule T mature mature. Anche le cellule di origine mielomonocitica, i granulociti e i monociti trasportano questo antigene. È rilevato nei linfomi centroblastici e immunoblastici.
• CD46 - Dimero O-glicosilato. E 'ampiamente distribuita nei tessuti ed espresso T e B linfociti, monociti, granulociti, cellule NK, piastrine, cellule endoteliali, fibroblasti, ma è assente sulla superficie degli eritrociti. CD46 fornisce protezione tissutale dall'azione del complemento.
• CD61 è un antigene piastrinico. È espresso su piastrine di sangue periferico e midollo osseo rosso, nonché su megacariociti e megacarioblasti. La sua definizione è usata come marker per la leucemia acuta megacarioblastica. L'espressione dell'antigene è assente o soppressa nei pazienti con trombastenia di Glanzmann.
• CD95, chiamato anche Fas o APO-1, è una glicoproteina transmembrana, un membro della famiglia dei recettori del fattore di necrosi tumorale. È espresso in quantità significative sui linfociti T del sangue periferico (CD4 + e CD8 +) e, in misura minore, sui linfociti B e le cellule NK. Questo antigene è anche espresso su granulociti, monociti, cellule tissutali e cellule neoplastiche. Il legame del CD95 al ligando di Fas (CD95L) induce l'apoptosi nelle cellule.
• CD95L, o ligando di Fas, una proteina di membrana appartenente alla famiglia dei recettori del fattore di necrosi tumorale. Questo antigene è espresso da linfociti T citotossici, cellule NK e molto spesso da cellule tumorali; l'induttore principale dell'apoptosi nelle cellule.
• HLA-DR è un determinante monomorfico delle molecole di classe II del principale complesso di istocompatibilità umana (HLA). Il marcatore è espresso su cellule di Langerhans, cellule dendritiche di organi linfoidi, alcuni tipi di macrofagi, linfociti B, cellule T attivate e cellule epiteliali del timo. Il test per questo marcatore viene utilizzato per quantificare i linfociti T attivati con il fenotipo CD3 + HLA-DR +.

Usando una diversa selezione di anticorpi monoclonali per i marcatori, è possibile fare un ritratto fenotipico delle cellule caratteristiche di una data forma di leucemia.

Oltre a utilizzare tecniche Immunofenotipizzazione per la diagnosi e diagnosi differenziale delle neoplasie ematologiche, particolarmente importante rivolto loro utilizzo nel processo di trattamento per valutare lo stato di remissione e frazione residua di cellule leucemiche. Conoscendo il "ritratto" fenotipica di blasti nel periodo della diagnosi, per questi marcatori che riesce a trovare cellule clone leucemiche in remissione, e dall'aumento del loro numero - per predire lo sviluppo di ricaduta a lungo (per 1-4 mesi) fino a quando i suoi tratti clinici e morfologici.

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