Microscopia confocale

La microscopia confocale è attualmente considerata uno dei metodi più promettenti per l'imaging della pelle in vivo, motivo per cui suscita un interesse insolitamente elevato sia tra i medici sia tra i rappresentanti degli istituti di ricerca.

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Capacità di microscopia confocale

In dermatologia, la microscopia laser confocale viene utilizzata per:

• studio della penetrazione dei composti nella pelle (vie di penetrazione, cinetica, distribuzione nella pelle);
• osservazione del funzionamento delle ghiandole (determinazione dello stato attivo e passivo);
• studi del letto microcircolatorio (anche in tempo reale);
• diagnostica delle neoplasie.

Senza entrare nei dettagli sui vantaggi e sugli svantaggi dei tipi di microscopia confocale sopra menzionati, notiamo che negli ultimi anni la microscopia confocale laser a fluorescenza è diventata sempre più popolare.

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Microscopia confocale per l'esame della pelle

Il microscopio confocale offre due opportunità inestimabili: lo studio dei tessuti a livello cellulare in uno stato di attività vitale fisiologica e la dimostrazione dei risultati dello studio (ovvero l'attività cellulare) in quattro dimensioni: altezza, larghezza, profondità e tempo. Per la qualità dell'immagine e la profondità dello studio, il ruolo più importante è svolto dalla capacità del tessuto di trasmettere la luce, ovvero dalla sua trasparenza. Il metodo di microscopia confocale è senza contatto: il fascio di luce non causa alcun danno o fastidio al paziente in esame o all'animale da esperimento.

La microscopia laser confocale a scansione (CSLM) viene utilizzata per esaminare la pelle. Il metodo consente di visualizzare l'epidermide e lo strato papillare del derma con una risoluzione prossima a quella istologica. Tutti i risultati dell'esame vengono visualizzati sul monitor e salvati come pacchetto di file immagine (come microfilm (in dinamica) o microfotografie).

Esistono due tipi di metodo:

• riflettente (riflettanza CSLM) - basato sul fatto che varie strutture intracellulari e intercellulari hanno diversi indici di rifrazione della luce, il che consente di ottenere un'immagine di contrasto.
• fluorescenza (fluorescenza CSLM): utilizza la luce laser che penetra nella pelle ed eccita gli eso- o endocromofori in essa presenti, che in risposta iniziano a emettere fotoni (ovvero emettono fluorescenza).

La risoluzione laterale è la distanza minima tra punti situati su un piano orizzontale, ovvero un piano parallelo alla superficie cutanea. La risoluzione assiale è la distanza minima tra punti situati su un piano perpendicolare alla superficie cutanea.

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Storia della microscopia confocale

L'idea di creare un microscopio in grado di mostrare una sezione di tessuto vivente a livello cellulare fu sviluppata attivamente 130 anni fa. L'elemento principale dei microscopi moderni fu progettato alla fine del XIX secolo ed era un disco rotante con minuscoli fori disposti a spirale. Questo disco fu inventato nel 1883 dallo studente tedesco Paul Nipkow, da cui prese il nome: disco di Nipkow (o disco di Nipkow). L'invenzione si basava sulla capacità della luce, passando attraverso minuscoli fori nel disco e una lente di ingrandimento, di penetrare in profondità nel tessuto e illuminare un frammento cellulare distante dalla superficie. Quando il disco ruota rapidamente, i frammenti formano un'unica immagine. Allontanando o avvicinando la struttura all'oggetto, è possibile variare la profondità della sezione ottica del tessuto in studio.

Fu solo con l'avvento dei videoregistratori negli anni '80 e dei computer in grado di elaborare le immagini nei primi anni '90 che divenne possibile creare e utilizzare in modo efficace i moderni microscopi impiegati oggi.