Virus dell'epatite E

Il virus dell'epatite E (HEV) ha una forma sferica, un diametro di 27-34 nm, il tipo di simmetria del nucleocapside è icosaedrico, non c'è membrana esterna.

Il virus dell'epatite E è stato identificato nelle feci di pazienti affetti da epatite virale non-A e non-B tramite la via di infezione enterale, nonché nelle feci di animali da esperimento (scimmie) infettati con lo stesso materiale contenente il virus, utilizzando la microscopia elettronica immunitaria (IEM) su siero di pazienti convalescenti da questa epatite.

Ad oggi è stato accertato che il virus dell'epatite E presenta le seguenti caratteristiche fisico-chimiche e biologiche.

• Morfologicamente è rappresentato da particelle sferiche senza guscio; la loro superficie presenta punte e depressioni; il virus si disintegra quando esposto a CS CL, congelamento/scongelamento e si conserva a -20 °C.
• Il diametro delle particelle virali è compreso tra 32 e 34 nm.
• Il genoma è rappresentato da RNA lungo 7,5 kb, a filamento singolo, poliadenilato.
• Il coefficiente di sedimentazione è 183 S (per particelle virali difettose - 165 S). La densità di galleggiamento è 1,29 g/cm³ ^nel gradiente KTa/Glu.
• La coltivazione in vitro non ha avuto successo.
• La somministrazione intracerebrale di una sospensione di estratto fecale contenente particelle di HEV a topi lattanti non provoca malattie.

Utilizzando la clonazione molecolare, sono state ottenute grandi quantità di HEV dalla bile di macachi infetti. È stata dimostrata l'identità delle particelle virali ottenute da estratti fecali di pazienti affetti da epatite E in varie regioni del mondo (Somalia, Borneo, Pakistan, Asia centrale, ecc.). La struttura del genoma di HEV è stata praticamente decifrata. Analizzando le sequenze nucleotidiche e l'organizzazione del genoma, è stato stabilito che HEV differisce dai picornavirus e che non può appartenere ai calicivirus, come inizialmente ipotizzato.

Il genoma è rappresentato da un RNA positivo a singolo filamento non frammentato di 7500 basi, contenente tre frame di lettura aperti (Open Reading Frame) che codificano per proteine specifiche del virus. Sulla superficie del virione sono presenti depressioni simili a coppe (calice greco), pertanto il virus è stato inizialmente incluso nella famiglia Caliciviridae (genere Hepavirus). Uno studio più dettagliato del genoma di HEV ha mostrato che la sequenza nucleotidica del suo RNA è unica e presenta solo alcune somiglianze con il virus della rosolia.

L'HEV è attualmente classificato come membro della famiglia Hepereviridae, genere Heperevirus, virus dell'epatite E.

Antigene(i) HEV - L'antigene HEV è stato identificato sulla superficie delle particelle virali mediante microscopia elettronica immunologica, negli epatociti, con metodi immunoistochimici. In animali da esperimento (macachi e scimpanzé) affetti da epatite E, l'antigene HEV è stato rilevato nel citoplasma degli epatociti utilizzando il metodo dell'immunofluorescenza stratificando sezioni di fegato con sieri degli stessi animali ottenuti durante il periodo di convalescenza; la specificità dell'antigene HEV è stata successivamente confermata in studi di assorbimento utilizzando proteine ricombinanti ottenute clonando il genoma HEV.

In studi immunomorfologici su scimmie infette da epatite E, depositi granulari di antigene HEV sono stati localizzati nel citoplasma degli epatociti, con granuli contenenti antigene HEV distribuiti in modo casuale e con un numero di granuli che variava significativamente nelle diverse cellule. Non è stata rilevata alcuna localizzazione preferenziale di epatociti positivi all'antigene HEV in alcuna zona specifica del lobulo epatico. L'antigene HEV contenente epatite è stato costantemente rilevato prima dell'aumento dell'attività dell'ALT, per poi persistere per l'intero periodo di iperenzimemia e praticamente scomparire dopo la normalizzazione dell'attività dell'ALT.

Sono state identificate sequenze genomiche dell'HEV nelle feci, nella bile e nel siero sanguigno di pazienti affetti da epatite E, sia negli esseri umani che negli animali da esperimento (scimmie); la risposta immunitaria umorale è stata studiata dalla fase acuta della malattia fino alla convalescenza.

La concentrazione più elevata di particelle HEV è stata rilevata nella bile dei macachi infetti prima del picco di attività dell'ALT nella fase di infezione, quando è stato registrato il picco di presenza di antigene HEV nel fegato.

L'RNA del virus HEV è stato trovato in campioni di feci, bile e siero di esseri umani e primati infetti.

La presenza di anticorpi specifici (anti-HEV) nel siero sanguigno di pazienti affetti da epatite E negli esseri umani e negli animali da esperimento è stata stabilita utilizzando la microscopia elettronica immunitaria e il metodo degli anticorpi fluorescenti utilizzando preparazioni di particelle HEV o sezioni epatiche contenenti HEV Ag come substrato.

Ulteriori studi trasversali su isolati di HEV e sieri di convalescenti ottenuti da pazienti in diverse regioni geografiche in cui si sono verificati focolai o casi sporadici di epatite E, nonché su particelle di HEV e sieri ottenuti da primati infettati da questi isolati, hanno infine convinto i ricercatori che esiste un singolo virus (o classe di virus sierologicamente correlati) responsabile in tutto il mondo dell'epatite E.

Viene mostrata la diversità genotipica dell'HEV. Sono stati identificati otto genotipi del virus, i cui principali prototipi erano i seguenti isolati: genotipo 1 - isolato di HEV dalla Birmania, 2 - dal Messico, 3 - dagli Stati Uniti, 4 - da Taiwan e Cina, 5 - dall'Italia, 6 - dalla Grecia, 7 - dalla Grecia (secondo isolato), 8 - dall'Argentina.

È stato dimostrato che nella fase acuta dell'epatite E nei macachi e negli scimpanzé circolano nel siero sanguigno le classi anti-HEV IgM e IgG, mentre nei sieri del periodo di convalescenza circolano solo le classi anti-HEV

In numerosi studi, l'anti-HEV IgM è stato rilevato nel 73% dei pazienti con epatite E nei primi 26 giorni dall'insorgenza dell'ittero; durante il periodo di recupero, l'anti-HEV IgG è stato rilevato nel 90% dei pazienti.

La fonte di infezione è esclusivamente umana, poiché il patogeno viene escreto con le feci. Il meccanismo di infezione è oro-fecale. La principale via di infezione è l'acqua contaminata da feci. La dose infettante è significativamente superiore a quella del virus dell'epatite A. La suscettibilità al virus HEV è universale. Le epidemie possono colpire decine di migliaia di persone in caso di violazione del regime di assunzione di bevande alcoliche, soprattutto durante i lavori stagionali estivi e autunnali.

Clinicamente, l'epatite E è più lieve dell'epatite A e non è stata osservata una transizione a una forma cronica. Nell'85-90% dei pazienti, l'epatite E è lieve o moderata, spesso asintomatica. Tuttavia, nelle donne in gravidanza, l'epatite E è grave, con un tasso di mortalità fino al 20%.

La microscopia elettronica immunologica viene utilizzata per la diagnostica; è stato proposto un sistema di test per la rilevazione di anticorpi contro gli antigeni dell'HEV. L'immunità post-infezione è forte, duratura ed è dovuta ad anticorpi neutralizzanti il virus e a cellule della memoria immunitaria. È stato proposto un vaccino a virione intero per la profilassi specifica e sono in fase di sviluppo vaccini vivi e ricombinanti.

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