Analisi batterioscopica dell'espettorato

L'identificazione tempestiva dell'agente infettivo è fondamentale per la scelta corretta del farmaco antibatterico, al fine di prevenire lo sviluppo di resistenza batterica quando un antibiotico viene prescritto empiricamente. La colorazione di Gram è il metodo più comune per colorare tutti i tipi di materiale ottenuto da un paziente (espettorato, lavaggio broncoalveolare, ecc.) per un'identificazione rapida e approssimativa dell'agente infettivo.

Una valutazione preliminare di un possibile agente eziologico viene effettuata mediante batterioscopia di uno striscio di espettorato colorato con Gram. Uno striscio di espettorato colorato con Gram viene esaminato prima di essere inoculato su terreno nutritivo anche per valutarne l'idoneità alla coltura e per identificare il probabile patogeno. L'espettorato è considerato idoneo se, a basso ingrandimento al microscopio, nello striscio colorato con Gram si riscontrano più di 25 leucociti e meno di 10 cellule epiteliali. I segni di un campione di espettorato di alta qualità utilizzabile per la coltura includono una predominanza di leucociti sulle cellule epiteliali, nonché la presenza di batteri di una specie localizzati all'interno o intorno ai leucociti. I batteri Gram-positivi nel preparato sono di colore blu scuro, mentre i batteri Gram-negativi sono di colore rosa. Gli agenti causali della polmonite atipica (micoplasma, legionella, rickettsia e clamidia) non sono colorati con il metodo di Gram, pertanto per rilevarli si utilizzano principalmente metodi sierologici.

La colorazione dello striscio di espettorato secondo Ziehl-Neelsen viene utilizzata per identificare i bacilli acido-resistenti, principalmente i micobatteri tubercolari. Il preparato viene preparato a partire da particelle purulente di espettorato, selezionate da 4-6 punti diversi. Le particelle selezionate vengono accuratamente macinate tra 2 vetrini fino a ottenere una massa omogenea, essiccate all'aria e fissate sulla fiamma di un bruciatore. I micobatteri tubercolari sono colorati di rosso, mentre tutti gli altri elementi dell'espettorato e i batteri sono colorati di blu. I micobatteri tubercolari appaiono come bastoncini sottili, leggermente ricurvi, di lunghezza variabile, con ispessimenti alle estremità o al centro, localizzati in gruppi o singolarmente. L'individuazione dei micobatteri tubercolari è il segno più affidabile di malattia polmonare tubercolare. Il metodo di colorazione dello striscio di Ziehl-Neelsen per le forme attive di tubercolosi polmonare ha una sensibilità del 50% e una specificità dell'80-85%.

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