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Ibridazione in situ
Ultima recensione: 04.07.2025
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La procedura di ibridazione può essere eseguita non solo su gel, su filtri o in soluzione, ma anche su preparati istologici o cromosomici. Questo metodo è chiamato ibridazione in situ. Una variante del metodo, in cui preparati di DNA o RNA marcati con fluorocromi vengono utilizzati come sonde, è chiamata FISH (ibradazione in situ con fluoresceina). La sonda di DNA marcata viene applicata a preparazioni di cromosomi in metafase, colorati in modo differenziale e preparati per l'ibridazione (denaturati). Il trattamento preliminare dei cromosomi viene utilizzato per facilitare l'accesso della sonda al DNA genomico. Dopo aver rimosso le molecole di DNA non legate e applicato un'emulsione fotosensibile (quando si utilizza un marcatore radioattivo), o aver eseguito un trattamento appropriato (quando si utilizzano sonde di DNA marcate con biotina o fluoresceina), i siti di localizzazione delle sequenze di DNA complementari alla sonda di DNA utilizzata possono essere rilevati direttamente al microscopio come punti caratteristici sopra le sezioni corrispondenti di determinati cromosomi.
Questo metodo di ricerca consente di determinare non solo l'affiliazione cromosomica, ma anche la localizzazione intracromosomica del gene studiato.
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