Reazione a catena della polimerasi (PCR) nella diagnosi delle malattie infettive

PCR - uno dei metodi per la diagnostica del DNA che permettono di aumentare il numero di copie di una porzione rilevabile del genoma (DNA) di batteri o virus è un milione di volte utilizzando un enzima DNA polimerasi. Un test per questo specifico segmento di acido nucleico genomico ripetutamente moltiplicato (amplificato) che permette la sua identificazione. In primo luogo, una molecola di DNA di batteri o virus di riscaldamento diviso in due catene, quindi in presenza di primer di DNA sintetizzati (sequenza di nucleotidi specifici della genomica definita) li vincola con tratti complementari di DNA, sintetizzato secondo filamento di acido nucleico dopo ciascun primer in presenza di una DNA polimerasi termostabile . Si ottengono due molecole di DNA. Il processo viene ripetuto molte volte. Per la diagnosi, una sola molecola di DNA, vale a dire un batterio o particella del virus. La reazione di un ulteriore passo - la sintesi del DNA sulla molecola di RNA utilizzando l'enzima trascrittasi inversa - ha permesso di testare virus a RNA come il virus HCV. PCR - processo in tre fasi, cicli ripetuti di denaturazione, appaiamento dei primer, sintesi del DNA (polimerizzazione). La quantità di DNA sintetizzato è stato identificato mediante ELISA o elettroforesi.

PCR può essere utilizzato in materiale biologico diverso - siero o plasma sanguigno, raschiando dell'uretra, biopsia, fluido pleurico, liquido cerebrospinale, etc. La prima PCR è stato utilizzato per la diagnosi di malattie infettive come l'epatite virale B, epatite virale C, epatite virale D, infezione da CMV, infezione a trasmissione sessuale infettiva (gonorrea, rifiuti diynaya, micoplasma, infezione Ureaplasma), tubercolosi, HIV infezione, ecc.

Il vantaggio della PCR nella diagnosi delle malattie infettive rispetto ad altri metodi di ricerca è il seguente:

• l'agente eziologico dell'infezione può essere trovato in qualsiasi ambiente biologico del corpo, compreso il materiale ottenuto mediante biopsia;
• È possibile diagnosticare malattie infettive nelle prime fasi della malattia;
• Una valutazione quantitativa dei risultati della ricerca è possibile (quanti virus o batteri sono contenuti nel materiale in esame);
• alta sensibilità del metodo; ad esempio, la sensibilità della PCR per il rilevamento di DNA del virus dell'epatite B nel sangue è 0,001 pg / ml (circa 4 × 10 ² copie / ml), mentre la sensibilità di un metodo di ibridazione DNA usando sonde ramificati - 2,1 pg / ml (circa 7 × 10 ⁵ copie / ml).

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