Virus dell'epatite A

L'epatite virale A è una malattia infettiva umana caratterizzata da un danno epatico predominante e manifestata da intossicazione clinica e ittero. Il virus dell'epatite A è stato rilevato nel 1973 da S. Feinstone (e altri) usando il metodo della microscopia a immuno-elettrone e infettando le scimmie - scimpanzé e uistitì. L'essenza del metodo della microscopia a immuno-elettrone è che gli anticorpi specifici (siero di convalescenza) vengono aggiunti al filtrato delle feci del paziente con epatite A e il precipitato è sottoposto a microscopia elettronica. A causa dell'interazione di virus con anticorpi specifici, subiscono aggregazioni specifiche. In questo caso, sono più facili da rilevare e l'aggregazione sotto l'influenza di anticorpi conferma la specificità dell'agente patogeno. La scoperta di S. Feinstone è stata confermata da esperimenti su volontari.

Il virus dell'epatite A ha una forma sferica, il diametro del virione è 27 nm. Il genoma è rappresentato da un RNA positivo a singolo filamento con una massa di 2,6 MD. Il supercapside è assente. Il tipo di simmetria è cubico - icosaedro. Il capside ha 32 capsomeri, è formato da quattro polipeptidi (VP1-VP4). Per le sue proprietà, il virus dell'epatite A appartiene al genere Heparnovirus, la famiglia Picornaviridae. Antigenicamente, il virus dell'epatite A (HAV - virus dell'epatite A) è omogeneo. L'HAV si moltiplica bene nel corpo di scimpanzé, babbuini, hamadryl e scimmie gambling (uistitì). Per molto tempo, il virus non ha potuto coltivare. Solo negli anni '80. è stato possibile ottenere colture cellulari in cui l'HAV si propaga. Inizialmente, per questi scopi, furono usate linee renali trapiantate del rene della scimmia rhesus (cultura FRhK-4), e ora - la linea trapiantata di cellule renali di scimmie verdi (cultura 4647).

Secondo le raccomandazioni degli esperti dell'OMS, è stata adottata la seguente nomenclatura dei marcatori del virus dell'epatite A: anticorpi anti-virus dell'epatite A dell'epatite A: virus IgM anti-NAV e IgG anti-NAV.

L'HAV è una piccola particella con un diametro di 27-30 nm, con simmetria icosaedrica e in possesso di omogeneità. Sul modello di diffrazione elettronica ottenuto dal metodo di aggregazione immunitaria, vengono rilevate particelle elettrone-dense con capsomeri disposti in posizione simmetrica disposti in posizione superficiale. Con il contrasto negativo, nelle preparazioni vengono rilevate sia particelle complete che vuote. Il Nucleocapside, a differenza di quello dell'influenza, non ha sporgenze e membrane superficiali. È anche importante che il virus HAV non abbia una struttura a forma di cuore.

Secondo le sue proprietà chimico-fisiche di virus dell'epatite A è legato alla famiglia di Picornaviridae, genere Enterovirus con numero atomico 72. Tuttavia, questa tassonomia era troppo insolito, e che ha trovato la possibilità di lasciare la terminologia "virus dell'epatite A".

Come tutti i virus della famiglia Picornaviridae, il virus dell'epatite A contiene acido ribonucleico. Alcuni laboratori hanno dimostrato la possibilità di clonare il genoma del virus dell'epatite A, che apre la prospettiva di ottenere preparati per il vaccino.

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Resistenza del virus dell'epatite A

Il virus è relativamente resistente alle alte temperature, acidi, solventi grassi (non ci sono lipidi), disinfettanti, tollera bene una temperatura bassa. Tutto ciò contribuisce alla sua conservazione a lungo termine nell'ambiente esterno. A temperatura ambiente, sopravvive per diverse settimane, a 60 ° C parzialmente perde l'infettività dopo 4-12 ore, completamente - dopo pochi minuti a 85 ° C. Altamente resistente al cloro, grazie al quale è in grado di penetrare nell'acqua del rubinetto attraverso le barriere degli impianti di trattamento delle acque.

Riassumendo tutti i dati, possiamo caratterizzare il virus dell'epatite A come segue:

• il maestro naturale è l'uomo;
• animali da esperimento - marmozet, scimpanzé;
• fonte di infezione - feci;
• malattia - epidemica ed endemica;
• la via di trasmissione è fecale-orale;
• periodo di incubazione - 14-40 giorni;
• transizione a epatite cronica - non annotata.

Le proprietà immunologiche del NAV sono le seguenti:

• Prototipo di ceppi - Ms-1, CR-326, GVG. Tutti sono immunologicamente simili o identici;
• Anticorpi - IgM e IgG, sono prodotti in risposta all'introduzione di proteine strutturali del virus e sono protettivi;
• I L'azione trofica del siero umano y-globulina - protegge o attenua la malattia nelle condizioni di somministrazione prima dell'infezione o durante il periodo di incubazione.

Le caratteristiche fisico-chimiche di NAU sono le seguenti:

• La morfologia è una particella sferica non a guscio con simmetria cubica, il capside è costituito da 32 capsomeri;
• Il diametro è 27-30 nm;
• La densità in CsCl (g / cm3) è 1,38-1,46 (particelle aperte), 1,33-1,34 (virione maturo), 1,29-1,31 (virioni immaturi, particelle vuote);
• Il coefficiente di sedimentazione è di 156-160 virioni maturi;
• Acido nucleico - RNA lineare a filamento singolo;
• Peso molecolare relativo - 2,25 106-2,8 106KD;
• Il numero di nucleotidi è 6.500-8.100.

La stabilità del NAV negli effetti fisico-chimici è la seguente:

• Cloroformio, etere - è stabile;
• Cloro, 0,5-1,5 mg / l, 5 ° C, 15 min - inattivazione parziale;
• Cloramina, 1 g / l, 20 ° C, 15 min - completa inattivazione;
• Formalina, 1: 4000, 35-37 ° С, 72 ore - completa inattivazione, 1: 350, 20 ° С, 60 min - inattivazione parziale.

Temperatura:

• 20-70 ° C - stabile;
• 56 ° С, 30 minuti - è stabile;
• 60 ° С, 12 ore - inattivazione parziale;
• 85 ° С, 1 min - inattivazione completa;
• Sterilizzazione in autoclave, 120 ° C. 20 minuti - completa inattivazione;
• Calore secco, 180 ° C, 1h - completa inattivazione;
• UV, 1,1 W, 1 min - inattivazione completa.

I dati presentati mostrano che le proprietà fisico-chimiche del virus dell'epatite A sono le più vicine agli enterovirus. Come altri enterovirus, l'HAV è resistente a molte soluzioni disinfettanti, completamente inattivato per diversi minuti a 85 ° C e autoclavato.

È dimostrato che il virus dell'epatite A può essere riprodotto nelle linee di coltura monolayer primarie e di trapianto di cellule umane e di scimmie. Si osserva una riproduzione particolarmente attiva del virus dell'epatite A in colture in vitro quando si utilizzano estratti di fegato di pazienti di scimmia come materiale di partenza. Tuttavia, va notato che in tutti gli esperimenti secondo una riproduzione del virus dell'epatite A in colture in vitro notevole lungo periodo di incubazione in passaggi primari (-10 a 4 settimane), successivamente accumulo di materiale aumenta genetiche virali, ma i valori assoluti sono molto insignificante, che dà motivo a molti ricercatori di parlare della replicazione incompleta del virus dell'epatite A nelle colture di tessuti.

Riassumendo i dati della letteratura sulla riproduzione del virus dell'epatite A da colture non-root, si può affermare che il fatto di una prolungata esperienza dell'HAV in vitro è indiscutibile. Le condizioni ottimali per un alto livello stabile di replicazione virale non sono state finalmente identificate e ciò limita lo studio delle sue proprietà biologiche, la produzione di una fonte di reagenti per la produzione di diagnostica e la progettazione di vaccini.

Allo stesso tempo, giudizi più ottimistici su questo problema possono essere trovati in letteratura. La soluzione di tutti i problemi legati alla coltivazione del virus dell'epatite A è una questione per il prossimo futuro. Quando studiare le condizioni ottimali HAV propagazione in coltura cellule embrionali renali scimmie rhesus rivelate due fasi: la fase di produzione del virus infettivo (fino a 6-8 giorni a 5 ° passaggio) e la fase di accumulazione intensiva di antigene virale. È anche dimostrato che l'accumulo più significativo dell'antigene virale avviene nelle condizioni della cosiddetta coltivazione a rulli (bottiglie rotanti). In questo modo si aprono ampie possibilità di ottenere un antigene culturale in grandi quantità e, di conseguenza, apparirà un materiale di partenza per la preparazione dei sistemi diagnostici e la produzione di preparati per vaccini.

Epidemiologia dell'epatite A

Il virus dell'epatite A ha un'alta patogenicità per l'uomo. Secondo la conclusione dell'OMS (1987), per l'insorgenza della malattia, è sufficiente infettare solo un virione. Tuttavia, la dose infettiva pratica è probabilmente molto più alta. La fonte dell'infezione è solo una persona infetta. Il virus viene rilasciato in grandi quantità con feci 12-14 giorni prima della comparsa di ittero e entro 3 settimane. Periodo itterico. Non sono state identificate differenze significative nell'isolamento dell'agente patogeno in pazienti con forme itteriche e asintomatiche di epatite A. Il metodo di infezione è fecale-orale, principalmente acquoso, e anche dalle vie domestiche e alimentari. Il metodo di infezione è fecale-orale, principalmente acquoso, e anche dalle vie domestiche e alimentari. La principale (primaria) via di trasmissione del virus è l'acqua. È anche possibile l'infezione nell'aria. La suscettibilità della popolazione è universale. Per lo più bambini sotto i 14 anni sono malati. La malattia ha una pronunciata stagionalità autunnale-invernale.

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I sintomi dell'epatite A

Il periodo di incubazione varia da 15 a 50 giorni, che dipende dalla quantità di dose infettante del virus, ma in media è di 28-30 giorni. Una volta nel corpo, l'epatite A virus si replica nei linfonodi regionali, nel sangue e quindi alle cellule del fegato e provoca epatite acuta diffusa che è accompagnata da lesioni di epatociti del fegato e reticuloendothelial cellule e una diminuzione delle sue funzioni di disintossicazione e di barriera. Il danno agli epatociti non si verifica a causa dell'azione diretta del virus, ma come risultato di meccanismi immunopatologici. L'immagine più tipico di epatite A è acuto forma itterica ciclica: il periodo di incubazione, il prodromica (preicteric), ittero e periodo di convalescenza. Tuttavia, nel focolai di infezione rivela un gran numero di pazienti con forme asintomatiche e anicteric di infezione, il numero dei quali predomina sopra icteric ( "fenomeno iceberg").

L'immunità post-infettiva è forte e duratura, causata da anticorpi neutralizzanti i virus e cellule di memoria immunitaria.

Diagnosi microbiologica dell'epatite A

La diagnosi di epatite A (tranne gli animali di infezione - scimpanzé marmozet, babbuini, che abbiamo) sulla base di vari metodi immunologici: metodo di immunofluorescenza DGC, hemagglutination adesione immunitario (complesso di antigene virale + anticorpo in presenza di complemento adsorbito su eritrociti e causa la loro adesione) . Tuttavia, l'applicabilità di questi metodi è limitato a causa della mancanza di antigeni virali specifici e reazione immunofluorescenza richiede biopsie epatiche, che è indesiderabile. Affidabile e specifico è il metodo della microscopia a immuno-elettrone, ma è molto laborioso. Pertanto, fino a quando l'unico metodo accettabile per la reazione immunologica è immunoenzimatico in fase solida sotto forma di IPM, o RIM, soprattutto nella modifica del "cattura" di immunoglobulina M. Nel nostro paese per questo sistema di analisi scopo proposto - "DIAG-A-GEO". Il principio di funzionamento di questo sistema di test è il seguente. Sulle pareti di polistirolo lunochek adsorbito primi anticorpi per immunoglobuline di classe M (antiimmunoglobuliny M) viene quindi aggiunto il siero del paziente esaminato. Se c'è classe IgM, si legano ad un anticorpo-Ti-M, poi aggiunti a un particolare antigene virale (virus dell'epatite A), che viene ottenuto mediante crescita in coltura cellulare. Il sistema viene risciacquato, e ad essa vengono aggiunti anticorpi antivirali marcati con perossidasi di rafano. Se tutti e quattro i componenti del sistema interagiscono, si presenta un "sandwich" a quattro strati:

• antiimmunoglobuline M,
• immunoglobuline M (contro il virus dell'epatite A - nel siero del test del paziente),
• antigene virale,
• anticorpi antivirali etichettati con un enzima.

Per rilevare questo complesso, alle lunette viene aggiunto un substrato per l'enzima. Sotto l'influenza dell'enzima, viene distrutto e si forma un prodotto colorato. L'intensità del colore può essere misurata quantitativamente con uno spettrofotometro o un fotocolorimetro.

Il vantaggio del metodo di "cattura" di IgM è che gli anticorpi di questa classe di immunoglobuline compaiono alla risposta immunitaria primaria e indicano uno stadio attivo di infezione, scompaiono dopo la malattia trasferita . Gli anticorpi antivirali appartenenti alla classe delle IgG, al contrario, persistono per lungo tempo dopo la malattia, fornendo l'immunità acquisita. Per il rilevamento del virus dell'epatite A è stato proposto un metodo di sonda del DNA: un vRNA complementare è usato come sonda del DNA.

Trattamento dell'epatite A

A causa del fatto che la produzione di interferone è interrotta nell'epatite virale, il trattamento dell'epatite A si basa sull'uso di interferone e induttore della sua sintesi endogena di amixina.

Prevenzione specifica dell'epatite A

Epatite seroprevention precedenza ampiamente applicata A usando gammaglobuline non era giustificato, tuttavia, l'accento è stato posto sulla vaccinazione nell'azienda stessa vaccinazione contro l'epatite A. A tal fine, sono in fase di sviluppo varie varianti di vaccini già in uso. In Russia, un vaccino efficace contro l'epatite A è stato ottenuto nel 1995 e ora è stato applicato con successo.