Vitamina A nel sangue

Valori di riferimento (norma) per la concentrazione di vitamina A (retinolo) nel siero sanguigno: nei bambini da 1 a 6 anni - 0,7-1,5 μmol/l, da 7 a 12 anni - 0,91-1,71 μmol/l, da 13 a 19 anni - 0,91-2,51 μmol/l; negli adulti - 1,05-2,09 μmol/l.

La vitamina A è una vitamina liposolubile ed esiste in due forme: la vitamina A vera e propria, o retinolo (presente solo nei prodotti di origine animale), e la provitamina A, nota come carotene (ottenuta da prodotti animali e vegetali), che può essere convertita in retinolo nelle pareti del tratto digerente. Circa il 50-90% del retinolo alimentare viene assorbito nell'intestino tenue e trasportato in un complesso legato ai chilomicroni al fegato, dove viene immagazzinato come palmitato di retinolo. Quando necessario, viene rilasciato nel flusso sanguigno come retinolo complessato con la proteina legante la vitamina A. Nel siero sanguigno, il complesso proteina legante la vitamina A + retinolo si lega alla transtiretina. Dal siero sanguigno, il retinolo viene assorbito dalle cellule bersaglio, come i fotorecettori della retina e dell'epitelio.

Quando l'organismo riceve vitamina A in quantità superiori al fabbisogno (180-430 mcg di retinolo al giorno a seconda di età, sesso e stato fisiologico), l'eccesso si deposita nel fegato, formando un deposito di questa vitamina. Quando l'assunzione di retinolo con gli alimenti viene ridotta, le sue riserve dal fegato vengono rilasciate nel flusso sanguigno, mantenendo la concentrazione di retinolo nel siero a un livello normale (superiore a 0,7 μmol/l). Altre forme biologicamente attive di vitamina A (retinale e acido retinoico) sono presenti nel sangue in concentrazioni molto basse (inferiori a 0,35 μmol/l); gli esteri del retinolo rappresentano circa il 5% della vitamina A totale (0,1-0,17 μmol/l).

La vitamina A svolge un ruolo importante nei processi di ossidoriduzione. Il retinolo promuove la formazione di glicogeno nel fegato e nei muscoli, contribuisce ad aumentare il livello di colesterolo nel sangue e partecipa alla sintesi di ormoni steroidei e sessuali. È necessario per la crescita e la formazione del sistema scheletrico, la risintesi della rodopsina e favorisce anche il normale funzionamento delle mucose e dell'epitelio tegumentario della pelle, prevenendone la metaplasia, l'ipercheratosi e l'eccessiva desquamazione. La vitamina A contribuisce a rafforzare capelli, denti e gengive. Negli ultimi anni, è stato dimostrato il ruolo multifattoriale della vitamina A nella prevenzione del cancro e nella regolazione dell'immunità (è necessaria per il completamento della fagocitosi, aumenta la sintesi di IgG, stimola la formazione di T-killer, stimola i T-helper di tipo II, ecc.). La vitamina A è un antiossidante attivo, che agisce principalmente in presenza di vitamina E; protegge la vitamina C dall'ossidazione. La carenza di vitamina A è considerata un fattore di rischio per le neoplasie maligne. Studi sperimentali hanno dimostrato che l'aumento del contenuto di vitamina A nella dieta aumenta l'aspettativa di vita media del 17,5%. Lo zinco è un cofattore essenziale nel metabolismo della vitamina A (necessario per la sintesi della proteina legante la vitamina A).

Il fabbisogno giornaliero medio di retinolo per gli adulti (20-50 anni) è di 1,2 mg (4000 UI, 1 UI equivale a 0,3 mcg di retinolo), per le donne in gravidanza - 1,5 mg (5000 UI), per le donne in allattamento - 1,8 mg (6000 UI), per le persone di età superiore ai 60 anni - 2,5 mg (10.000 UI). Almeno un terzo del fabbisogno giornaliero di retinolo dovrebbe essere fornito all'organismo in forma finita; il resto può essere coperto dall'assunzione di carotenoidi, da cui si forma il retinolo nell'organismo. È importante tenere presente che circa il 30% del retinolo presente negli alimenti viene distrutto durante il trattamento termico. L'attività del retinolo è 2 volte superiore a quella del carotene, inoltre solo il 30-40% di quest'ultimo viene assorbito a livello intestinale. Pertanto, nella valutazione della dieta, si ritiene che 1 mg di retinolo equivalga approssimativamente a 6 mg di carotenoidi.

Determinazione del retinolo (vitamina A) e dei carotenoidi nel siero sanguigno secondo Bessey modificato da LA Anisimova

Principio del metodo

La determinazione della vitamina A e dei carotenoidi si basa sulla loro idrolisi in una soluzione alcolica alcalina seguita dall'estrazione con una miscela di solventi organici.

Reagenti

• Soluzione di idrossido di potassio (KOH) 11 M.
• Alcol etilico al 96%.
• Soluzione 1 M di idrossido di potassio (KOH) in alcol etilico al 96%: 1 volume di soluzione 11 M di KOH viene miscelato con 10 volumi di alcol etilico al 96%. Il reagente viene preparato il giorno dello studio. Se si verifica colorazione durante la miscelazione, l'alcol deve essere purificato per distillazione prima dell'uso.
• Xilene, chimicamente puro
• Ottano, chimicamente puro
• Miscela di xilene e ottano: preparata mescolando volumi uguali di xilene e ottano.

Gli studi vengono effettuati utilizzando uno spettrofotometro.

Il processo di determinazione della vitamina A

Il sangue prelevato dal dito (circa 1 ml) viene inserito in una provetta da centrifuga e immerso in un contenitore di vetro con acqua tiepida (temperatura 40-45 °C) per 20-30 minuti. Per separare il siero, il coagulo di sangue viene delicatamente aspirato lungo il bordo delle pareti della provetta con una sottile bacchetta di vetro e centrifugato a 3000 giri al minuto per 10 minuti.

Si raccolgono 0,12 ml di siero e si trasferiscono in una provetta per agglutinazione, dove si aggiungono 0,12 ml di soluzione alcolica di idrossido di potassio 1 M. Il contenuto viene agitato accuratamente.

Le provette con i campioni vengono poste in un bagno d'acqua per 20 minuti a una temperatura di 60° C per effettuare l'idrolisi.

I campioni vengono raffreddati e vengono aggiunti 0,12 ml di miscela xilene-ottano, quindi agitati energicamente per 10-15 secondi. Vengono quindi raffreddati nuovamente e centrifugati.

Lo strato superiore contenente vitamina A e carotenoidi viene rimosso con attenzione utilizzando una pipetta Pasteur con bulbo di gomma e trasferito in microcuvette.

I campioni vengono analizzati mediante spettrofotometro a una lunghezza d'onda di 328 nm per determinare la vitamina A e a una lunghezza d'onda di 460 nm per determinare i carotenoidi.

Dopo la spettrofotometria, i campioni vengono esposti a radiazioni ultraviolette per distruggere la vitamina A. A tale scopo, una lampada al quarzo (battericida) viene installata a una distanza di 15-20 cm dalle microcuvette, in modo che la parte della cuvetta riempita con il liquido sia esposta alle radiazioni; il tempo di irradiazione è di 45-60 min.

I campioni vengono nuovamente analizzati mediante spettrofotometria a una lunghezza d'onda di 328 nm. Il contenuto di vitamina A viene determinato dalla differenza nei valori di estinzione (densità ottica) tenendo conto del coefficiente (fattore) 637 calcolato da Bessey per la vitamina A.

Il calcolo viene effettuato secondo la formula:

X = 637 × (E328(1) - E328(2)),

Dove X è il contenuto di vitamina A, μg/dl; 637 è il coefficiente calcolato da Bessey per determinare la vitamina A; E328(1) è la densità ottica della soluzione prima dell'irradiazione; E328(2) è la densità ottica della soluzione dopo l'irradiazione.

Il coefficiente di conversione della concentrazione di vitamina A da µg/dL a µmol/L è 0,035.

Il contenuto di carotenoidi si calcola utilizzando la formula:

X = 480-E480,

Dove X è il contenuto di carotenoidi, μg/dl; 480 è il coefficiente calcolato da Bessey per la determinazione dei carotenoidi; E480 è la densità ottica della soluzione in esame.

Nota

Secondo Bessey, durante la ricerca è possibile utilizzare un volume di siero maggiore o minore, ma il suo rapporto con il volume della soluzione alcolica deve essere costante a qualsiasi variazione del volume (quantità) della miscela xilene-ottano.

Il contenuto normale di vitamina A nel siero sanguigno è: nei neonati e nei lattanti - 160-270 μg/l; negli adulti - 1,05-2,45 μmol/l (300-700 μg/l). Il contenuto di carotenoidi nel siero sanguigno degli adulti è 800-2300 μg/l.