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Microscopia corneale confocale in tempo reale
Ultima recensione: 06.07.2025
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La microscopia confocale della cornea è uno dei metodi di ricerca moderni; consente il monitoraggio intravitale della cornea con visualizzazione dei tessuti a livello cellulare e microstrutturale.
Questo metodo, grazie alla progettazione originale del microscopio e al suo elevato potere di risoluzione, consente la visualizzazione del tessuto corneale vivo, la misurazione dello spessore di ciascuno dei suoi strati e la valutazione del grado di alterazioni morfologiche.
Lo scopo della microscopia confocale corneale
Caratterizzare i cambiamenti morfologici della cornea che si verificano in varie malattie infiammatorie e distrofiche, nonché a seguito di interventi chirurgici ed esposizione al CL.
I dati dell'esame morfologico sono necessari per valutare la gravità del processo patologico, l'efficacia del trattamento e per determinare le tattiche di gestione del paziente.
Indicazioni per la procedura
- Malattie infiammatorie della cornea ( cheratite ).
- Malattie distrofiche della cornea ( cheratocono, distrofia di Fuchs, ecc.).
- Sindrome dell'occhio secco.
- Condizioni successive ad interventi chirurgici sulla cornea ( trapianto di cornea penetrante, interventi cheratorefrattivi).
- Condizioni associate all'uso delle lenti a contatto.
Tecnica microscopia confocale della cornea
Lo studio viene eseguito utilizzando un microscopio confocale ConfoScan 4 (Nider) con un ingrandimento di 500 volte. Il dispositivo consente di esaminare la cornea in tutto il suo spessore.
Le dimensioni dell'area esaminata sono 440×330 μm, lo spessore dello strato di scansione è di 5 μm. La lente con una goccia di gel viene avvicinata alla cornea fino a toccarla e viene installata in modo che lo spessore dello strato di liquido di immersione sia di 2 mm. Il design del dispositivo consente di esaminare la cornea nella zona centrale e nelle sue aree paracentrali.
Prestazione normale
Immagine morfologica normale della cornea
L'epitelio anteriore è costituito da 5-6 strati di cellule. Lo spessore medio dell'intero epitelio è di circa 50 µm. In base alla struttura morfologica, si distinguono i seguenti strati (dall'interno verso l'esterno): basale, a forma di lesina, e superficiale.
- Lo strato più interno (basale) è rappresentato da cellule piccole, dense e cilindriche, senza nucleo visibile. I confini delle cellule basali sono chiari e luminosi.
- Lo strato intermedio è costituito da 2-3 strati di cellule spinose (alate) con profonde invaginazioni in cui sono immerse le escrescenze delle cellule vicine. Microscopicamente, i confini cellulari sono piuttosto evidenti e i nuclei possono non essere definiti o essere poco chiari.
- Lo strato superficiale dell'epitelio è rappresentato da uno o due strati di cellule poligonali con confini netti e densità omogenea. I nuclei sono solitamente più chiari del citoplasma, nel quale si può distinguere anche un anello scuro perinucleare.
Tra le cellule dello strato superficiale si distinguono cellule scure e chiare. L'aumentata riflettività delle cellule epiteliali indica una diminuzione del loro metabolismo e l'inizio della loro desquamazione.
La membrana di Bowman è una struttura trasparente che non riflette la luce, quindi è normalmente impossibile visualizzarla con la microscopia confocale.
Il plesso nervoso subbasale si trova sotto la membrana di Bowman. Normalmente, le fibre nervose appaiono come strisce luminose che corrono parallele su uno sfondo scuro, a contatto tra loro. La riflettività (riflettività) può essere irregolare lungo la fibra.
Lo stroma corneale occupa dall'80 al 90% dello spessore della cornea ed è costituito da componenti cellulari ed extracellulari. I principali elementi cellulari dello stroma sono i cheratociti, che costituiscono circa il 5% del volume.
Una tipica immagine microscopica dello stroma comprende diversi corpi ovali irregolari e brillanti (nuclei cheratocitari) che si trovano nello spessore di una matrice trasparente grigio scuro o nera. Normalmente, la visualizzazione delle strutture extracellulari è impossibile a causa della loro trasparenza. Lo stroma può essere suddiviso condizionatamente in sottostrati: anteriore (situato direttamente sotto la membrana di Bowman e costituisce il 10% dello spessore dello stroma), antero-medio, medio e posteriore.
La densità media dei cheratociti è maggiore nello stroma anteriore, con una graduale diminuzione verso gli strati posteriori. La densità delle cellule stromali anteriori è quasi il doppio di quella delle cellule stromali posteriori (considerando la densità delle cellule stromali anteriori pari al 100%, la densità delle cellule stromali posteriori sarà di circa il 53,7%). Nello stroma anteriore, i nuclei dei cheratociti hanno una forma arrotondata a forma di fagiolo, mentre nello stroma posteriore sono ovali e più allungati.
I nuclei dei cheratociti possono variare in luminosità. La diversa capacità di riflettere la luce dipende dal loro stato metabolico. Le cellule più luminose sono considerate cheratociti attivati (cellule "da stress"), la cui attività è finalizzata al mantenimento dell'omeostasi interna della cornea. Nel campo visivo normale e in quello normale si trovano singole cellule attivate.
Le fibre nervose nello stroma corneale anteriore sono visualizzate come bande luminose e omogenee, che spesso formano biforcazioni.
La membrana di Descemet è normalmente trasparente e non è visibile tramite microscopia confocale.
L'epitelio posteriore è un monostrato di cellule piatte esagonali o poligonali con una superficie uniformemente chiara su uno sfondo di confini intercellulari chiari e scuri.
Il dispositivo è in grado di calcolare manualmente o automaticamente la densità cellulare, la loro area e il coefficiente di variabilità.
Cambiamenti patologici nella struttura della cornea
Il cheratocono è caratterizzato da alterazioni significative dell'epitelio anteriore e dello stroma della cornea.
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